几株抗血吸虫单克隆抗体细胞株的建立与特性鉴定

为了对血吸虫病的免疫诊断和免疫预防提供有价值的单克隆抗体,通过2次骨髓瘤细胞与感染日本血吸虫的小鼠脾细胞间的融合试验和多次筛选以及克隆化,建立了4株分泌单克隆抗体的细胞株。其中2株的靶抗原为血吸虫成虫肠道;1株为成虫表面膜;另一株为成虫的肌细胞或纤维细胞。免疫球蛋白亚类鉴定表明前3株均为IgG_1。除了SM 48-2对虫卵呈弱反应外,未见对血吸虫虫卵、尾蚴、童虫有阳性反应;亦未见对曼氏血吸虫、肺吸虫、华枝睾吸虫、疟原虫及利什曼原虫有阳性反应。这几株细胞已在体外培养下稳定地分泌特异性抗体达6个月之久。     

Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的方法学研究

本文观察了影响单克隆抗体Dot—ELISA检测血吸虫循环抗原的有关因素。经改进后的方法,以国产纤维薄膜为载体,0.05％Tw20作为封闭剂,整个反应时间缩短至1.5h,与原方法检测同批病人血清及正常人血清,无论敏感性、特异性与反应强度均一致。改进后的方法,节省试剂,降低成本,缩短时间,更利于推广应用。     

抗日本血吸虫碱性磷酸酶单克隆抗体的研究(简报)

日本血吸虫成虫具有明显的碱性磷酸酶活力。研究该酶在血吸虫生命过程中所起的作用将可能为寻找新药、防治血吸虫病提供线索。本研究从成虫体内分离提取了碱性磷酸酶,并用它免疫BALB/C小鼠,然后取免疫小鼠的脾淋巴细胞与缺陷型小鼠骨髓瘤细胞NSI进行杂交。以 HAT培养基选择培养杂交瘤细胞。10天后采用间接法免疫荧光抗体试验测定杂交瘤细胞培养上清。挑选阳性孔的杂交瘤细胞作2～3次克隆化培养,获得了抗血吸虫的单克隆杂交细胞株。单克隆杂交瘤细胞的培养液及单克隆杂交瘤细胞接种同种小鼠所取得的腹水,经成虫冰     

用液氮冻存的脾细胞进行细胞融合

<正> 制备单克隆抗体的细胞杂交技术是建立在骨髓瘤细胞与脾细胞融合的基础上。脾细胞通常来自免疫的或感染病原体的BALB/c小鼠。到达免疫高峰或感染高峰的小鼠需及时应用,否则引起动物死亡或需重新加强免疫,造成研究工作中人力、物力和时间上极大的浪费。如果脾细胞能象骨髓瘤细胞或分泌     

日本血吸虫4类循环抗原和抗体的检测对感染兔疗效考核价值研究

目的观察感染家兔在治疗前后血清中循环抗原和循环抗体的动态变化情况。方法采用日本血吸虫4株单克隆抗体3D8,5C7,SM21－3及SM38m（靶抗原分别为肠相关多糖蛋白抗原、肠相关蛋白抗原、虫卵抗原和成虫表膜抗原）作为捕获抗体,用斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）检测4类循环抗原,与常规ELISA检测IgG抗体比较。结果感染日本血吸虫家兔在经硝唑咪治疗后1～2个月,循环抗原基本转阴,而IgG抗体一直维持较高水平。结论循环抗原具有较好的疗效考核价值,IgG抗体不具有疗效考核作用。     

血吸虫病患者血清中循环25kD表膜抗原的检测

采用细胞杂交瘤技术获得一株血吸虫成虫抗原的单克隆抗体SM 38-3。其靶抗原为成虫表膜,免疫球蛋白型为1gG 2a,能识别血吸虫分子量为25k D的表膜蛋白抗原表位。该单克隆抗体纯化后标记过氧化物酶,用于Dot-ELISA测定慢性血吸虫病人血清115份,阳性反应103份,阳性率为89.6％;测定急性病人血清89份,阳性反应85份,阳性率为95.5％;测定141份正常人血清,阳性反应2份,假阳性率为1.4％。与血吸虫肠相关抗原的检测比较,结果阳性率与抗原滴度均无明显差别。     

日本血吸虫虫卵单克隆抗体的初步研究

将血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫 BALB/C 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞 SP 2/0杂交融合,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测特异性抗体,获得一株稳定地分泌单克隆抗体的细胞株 SM21-8。该 SM21-3的免疫球蛋白型为 IgM,其靶抗原为血吸虫卵,能识别分子量20～67kD 多个重复表位的虫卵糖蛋白。用 SM21-3 ELIS A 双抗体法检测 SEA,湖南重疫区粪检阳性的慢性血吸虫病人血清的阳性率为80.0%(44/55),正常人血清阳性率为5.0%(1/20)。纯化的 SM21-3经荧光素标记后用直接荧光抗体法定位地检出肉芽肿组织中的虫卵抗原。结果表明,用 SM21-3 ELISA 双抗体法可检出部分重感染病人血清中的微量抗原,该抗原也是肝肉芽肿形成的主要因素。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

旋毛虫部分抗原表位的识别与分析

[目的 ]筛选旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中具有免疫显性的表位。 [方法 ]采用杂交瘤技术 ,获得 15株特异性单克隆抗体 ,随后用酶联免疫吸附试验 (ELISA)、免疫印迹法 (Westernblotting)和间接免疫荧光试验(IFA)对部分免疫显性抗原进行分析。 [结果 ]Westernblotting试验显示 ,6株单抗与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原反应显示有特异条带 ,分子量为 40～ 70kDa ;而多抗血清则可识别 2 0～ 2 0 0kDa之间 10条条带。IFA可观察到 ,6株单抗中有 4株单抗的靶抗原定位在旋毛虫肌幼虫表皮层上 ,另 2株定位于杆状体 (stichosome)及表皮层。 [结论 ]识别与分析部分旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中具有免疫显性的表位 ,为纯化旋毛虫的抗原及疫苗靶抗原的研制提供了有价值的实验依据。