从RPMI8866细胞制备CD23分子最佳条件及提取方法的研究

建立从高表达ＣＤ２３分子的ＲＰＭＩ８８６６细胞株分离制备ＣＤ２３分子的两种方法：自然裂解法和木瓜蛋白酶水解法。比较了此两法的优劣，探讨了ＣＤ２３回收量的影响因素，经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ技术鉴定出制备品中１８，３７，４２，４５和８６ＫＤａ的ＣＤ２３片段。结果表明，上述方法简便，可靠，易行，且回收量较高。可供研究及分离其它膜分子参考。     

可溶性CD23的B细胞生长因子效应分析

应用本室提取、鉴定的可溶性 CD 23(SCD 23)作为刺激因子,观察分析其对正常人外周血淋巴细胞(PBL)的促增殖效应。首次表明,SCD 23对于正常人PBL无直接活化作用,而对由 SAC预刺激活化后的人外周血B淋巴细胞具有显著的促生长效应。IgE包被的羊红细胞(IgE-SRBC)吸收实验进一步证明了效应成份为具有IgE结合特性的可溶性分子。     

从RPMI8866细胞制备CD23分子最佳条件及提取方法的研究

建立从高表达CD23分子的RPMI8866细胞株分离制备CD23分子的两种方法:自然裂解法和木瓜蛋白酶水解法。比较了此两法的优劣,探讨了CD23回收量的影响因素,经Western blot-ting技术鉴定出制备品中18、37、42、45和86KDa的CD23片段。结果表明,上述方法简便、可靠、易行,且回收量较高。可供研究及分离其它膜分子参考。     

鉴定IgE BF/sCD23的IgE介导的间接Western印迹技术的建立

基于 Western 印迹技术的基本原理,利用 IgE 结合因子/可溶性 CD23(IgEBF/sCD23)能够和 IgEFC 端特异性结合的特点,在系统研究了包括:IgE 浓度,反应时间及转移条件等数种因素后,首创了 IgE 介导的间接 Western 印迹技术.用于对 SDS—PAGE 电泳分离后样品中 IgEBF/sCD23特异性片段进行鉴定.实践证明:该法具有重复性高,操作简便及节约资金等优点.运用该技术,我们确定了 RPMI8866细胞上清中具有 IgEBF 活性的五种不同分子量的多肽.此方法的建立对开展 IgEBF/sCD23的研究以及其它特异性分子的鉴定都具有参考价值.