Shh通路介导损伤后反应性星形胶质细胞获得干细胞潜能

目的 探讨Shh信号通路对大脑皮质反应性星形胶质细胞（RAS）获得神经干细胞潜能的影响。方法 体外原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,以肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1α和C1q三种因子诱导炎症型RAS,划痕实验制备创伤型RAS,使用免疫荧光染色法观察细胞形态及纯度。实验分为普通星形胶质细胞组（对照组）、炎症组、划痕组（创伤组）。炎症组培养至干预后 24 h,对照组和划痕组培养至第 5天进行免疫荧光染色观察巢蛋白（Nestin）阳性细胞,运用Western blot技术检测不同损伤模型的细胞中Shh蛋白的表达量。之后各组细胞培养 至第7天更换神经干细胞培养基,将前述3组各自再分为激活组（各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh激活剂SAG）和抑制组（各组细胞更换神经干细胞培养基后添加Shh抑制剂环巴胺）两个亚组,培养14 d后采用qRT-PCR检测各亚组 RAS源性神经干细胞相关基因的表达量。结果 细胞损伤模型中,免疫荧光染色证明各组细胞中划痕组Nestin阳性细胞明显多于炎症组和对照组。Western blot结果显示2组损伤细胞中划痕组Shh蛋白表达量高于炎症组（P＜0.05）。更换神经干细胞培养基后,激活组中 2 组损伤细胞的干细胞相关基因 Nestin、Pax-6、Sox-2、Oct-4 和Map-2的表达水平均有所升高,其中由划痕诱导的RAS神经干细胞相关基因Nestin、Pax-6、Sox-2、Oct-4和Map-2的表达水平高于炎症诱导的 RAS神经干细胞和普通星形胶质细胞（P＜0.01）;添加 Shh抑制剂后,3组上述基因表达量皆明显降低,但划痕组的表达量仍高于其他 2组（P＜0.01）。结论 在体外,Shh信号通路可以介导损伤后大脑皮质RAS获得干细胞潜能。     

3D打印胶原/壳聚糖支架改善大鼠脊髓损伤后神经功能恢复

文题释义：壳聚糖：为一种天然多糖,是虾蟹等低等动物外壳的重要成分,具有一定的机械强度,并且具有良好的生物相容性和抗菌性,在生物工程领域具有较好的应用前景。 3D生物打印：是组织工程中最重要的技术之一。目前常用的三维生物打印方法包括喷墨打印、挤压生物打印和激光生物打印,选择好合适的材料后,在计算机指导下根据所选择的生物材料和细胞类型逐层准确地打印出所设计的结构。 背景：3D打印技术可以根据需求制备出满足脊髓植入形状、大小和表面形态要求的生物支架。 目的：观察3D打印胶原/壳聚糖支架对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响。 方法：将胶原和壳聚糖按2∶1的质量比混合,采用冷冻干燥法制备普通胶原/壳聚糖支架,采用3D打印机制备3D打印胶原/壳聚糖支架,分别测量两种支架的孔隙率和弹性模量,电镜观察支架形态。将神经干细胞分别与3D打印胶原/壳聚糖支架、普通胶原/壳聚糖支架共培养,进行扫描电镜观察与CCK-8检测。将40只雌性SD大鼠(由中国人民解放军医学科学院军事科学院提供)随机分成4组：假手术组、脊髓损伤组、普通胶    原/壳聚糖支架组和3D打印胶原/壳聚糖支架组,后3组制作脊髓全横断损伤模型,普通胶原/壳聚糖支架组和3D打印胶原/壳聚糖支架组损伤处填充对应的支架材料,术后相应时间点进行后肢功能BBB评分、斜坡实验、神经电生理检测与磁共振平扫。实验方案经天津市神经创伤重点实验室伦理委员会批准。 结果与结论：①扫描电镜显示,3D打印胶原/壳聚糖支架具有互连的多孔结构,普通胶原/壳聚糖支架内部结构紊乱;②神经干细胞在3D打印胶原/壳聚糖支架表面生长良好,完全伸展,且3D打印胶原/壳聚糖支架表面神经干细胞的活性显著高于普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);③3D打印胶原/壳聚糖支架的孔隙率与弹性模量均高于普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);④3D打印胶原/壳聚糖支架组术后3-8周的BBB评分高于脊髓损伤组、普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05),术后4,6,8周的斜坡实验角度大于脊髓损伤组、普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);⑤3D打印胶原/壳聚糖支架组术后8周的运动诱发电位振幅、体感诱发电位振幅大于脊髓损伤组与普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05),运动诱发电位潜伏期、体感诱发电位潜伏期短于脊髓损伤组与普通胶原/壳聚糖支架组(P < 0.05);⑥磁共振平扫显示与脊髓损伤组及普通胶原/壳聚糖支架组比较,3D打印胶原/壳聚糖支架组损伤处具有较好的连续性与较多的神经纤维束通过;⑦结果表明,3D打印胶原/壳聚糖支架可促进脊髓损伤大鼠神经功能的修复。 ORCID: 0000-0001-5771-8222(史新宇) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

负载脑源性神经营养因子胶原/肝素硫酸支架促进颅脑创伤大鼠神经运动功能的恢复

文题释义：脑源性神经营养因子：是一种来源于脑组织的分子质量为12.3 kD的多肽或蛋白质,对神经系统损伤等具有一定的治疗潜能,能通过多种机制营养神经元,促进其再生和生长发育。胶原：广泛分布于细胞外基质中,能够为神经细胞的增殖、分化和代谢提供适宜的微环境,具有免疫原性低、生物降解性和生物相容性好等特点,缺点在于其力学性能较差。 硫酸肝素：是一种黏多糖,是神经细胞基底膜、细胞外基质的重要组成部分,能够调节生物活性,促进神经纤维的再生。 背景：研究表明胶原和硫酸肝素交联后可有效固定生长因子,显著改善脊髓损伤大鼠的神经运动功能恢复。 目的：观察负载脑源性生长因子胶原/硫酸肝素支架移植修复颅脑创伤的效果。方法：制作胶原支架、胶原/硫酸肝素支架与负载脑源性神经营养因子的胶原/硫酸肝素支架,检测胶原支架、胶原/硫酸肝素支架的孔隙率、吸水率、压缩模量和压缩应力;检测载脑源性生长因子胶原/硫酸肝素支架的体外缓释性能;检测胶原/硫酸肝素支架与负载脑源性神经营养因子的胶原/硫酸肝素支架的细胞毒性与细胞相容性。将48只SD大鼠随机分4组干预：对照组开骨窗后缝合,空腔组仅制作颅脑创伤空腔模型,支架组、生长因子支架组颅脑创伤后空腔处分别植入胶原/硫酸肝素支架、负载脑源性神经营养因子的胶原/硫酸肝素支架,术后分别进行改良神经功能缺损评分、水迷宫测试与脑损伤形态学观察。动物实验获得武警特色医学中心伦理委员会批准。结果与结论：①胶原/硫酸肝素支架的孔隙率、压缩模量和压缩应力高于胶原支架(P < 0.05),吸水率低于胶原支架(P < 0.05);②胶原/硫酸肝素支架无细胞毒性,负载脑源性神经营养因子后更加有利于脑微血管内皮细胞的增殖;脑微血管内皮细胞在负载脑源性神经营养因子支架微孔内生长良好,分布均匀;③形态学观察显示,两支架组损伤灶处可见大量新生神经细胞及神经纤维,其中以生长因子支架组的新生神经细胞数量及神经纤维密度更高;④生长因子支架组大鼠的逃逸潜伏期短于空腔组、支架组(P < 0.01,P < 0.05),象限停留时间和平台穿越次数高于支架组、空腔组(P < 0.01,P < 0.05);⑤生长因子支架组术后3-7周的改良神经功能缺损评分低于支架组、空腔组(P < 0.05,P < 0.01);⑥结果表明,负载脑源性神经营养因子胶原/硫酸肝素支架移植可以促进大鼠颅脑创伤后神经运动功能的恢复。ORCID: 0000-0003-2076-3606(张健) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料;骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性;组织工程     

海藻糖对帕金森病氧化损伤保护作用及机制研究

目的研究海藻糖对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的shsy5y细胞损伤的保护作用及机制。方法利用MPP+诱导损伤shsy5y建立帕金森病模型,分为对照组、损伤组、实验1组(海藻糖10mmol/L)、实验2组(海藻糖50mmol/L)和实验3组(海藻糖100mmol/L)。CCK-8法检测细胞存活率,利用二乙酰二氯氢化荧光素探针检测shsy5y细胞活性氧水平,hoechst 33342染色观察海藻糖对MPP+诱导的细胞凋亡保护作用,Western blot检测Nrf2、血红素氧化酶1(heme oxygenase-1,HO-1)抗氧化损伤蛋白表达。结果与对照组比较,损伤组shsy5y细胞存活率明显降低(P<0.01),Nrf2和HO-1表达明显降低(0.676±0.020 vs 1.000±0.067,P<0.05;0.546±0.049vs 1.000±0.048,P<0.01)。损伤组MPP+可以显著诱导shsy5y细胞发生凋亡,核碎裂,不同浓度实验组可以逆转这种诱导凋亡。实验1组Nrf2表达较损伤组明显升高,实验2组和实验3组Nrf2和HO-1表达较损伤组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。损伤组shsy5y细胞内绿色荧光较对照组明显升高,不同浓度实验组随海藻糖浓度升高,shsy5y细胞内绿色荧光明显减少。结论海藻糖可以逆转MPP+作用的shsy5y细胞损伤,这一作用路径可能是通过促进Nrf2/HO-1信号通路激活,减少活性氧损伤,从而起到保护作用。     

血管性帕金森综合征的研究进展

血管性帕金森综合征(vascular parkinsonism,VaP)是临床上常见的继发性帕金森综合征的一种,由脑小血管损伤引起基底节神经元网络缺氧、代谢异常以及神经微环境的完整性破坏等导致.VaP的临床表现与血管损伤有关,其危险因素、病因、临床表现与帕金森病(Parkinson's disease,PD)均有明显差...     

颅脑海水浸泡伤损伤机制研究进展

颅脑海水浸泡伤是一类特殊的复合型损伤, 低温、高渗、高碱、高盐、细菌感染等为主要致伤原因, 具有损伤机制复杂、救治困难、预后差等特点。目前, 颅脑海水浸泡伤损伤机制的研究主要是通过构建动物实验模型, 在组织、细胞、细胞器、分子等层面展开。但由于颅脑海水浸泡伤相比陆上单纯颅脑损伤伤情更为复杂, 故其稳定的疾病模型构建不易。针对颅脑海水浸泡伤损伤机制方面的研究大多相对单一、片面, 存在诸多不同观点, 其具体损伤机制至今尚未明确。笔者就颅脑海水浸泡伤损伤机制的研究进展进行综述, 以期促进颅脑海水浸泡伤机制的深入研究, 为临床救治提供参考。     

创伤性脑损伤相关神经炎症的研究进展 #br#

创伤性脑损伤（TBI）发生时,外力立即造成神经系统损害。这种原发性损伤触发了体内生化级联以及新 陈代谢和细胞变化在内的继发性神经损害,称为继发性脑损伤。TBI后的神经炎症是持续的神经元损伤的关键因 素。神经炎症涉及损伤后细胞和分子调控机制,包括神经胶质（小胶质细胞和星形胶质细胞）的激活,引起脑内的炎 症介质的释放,导致周围免疫细胞的募集。了解 TBI炎症病理生理学的最新进展对于制定更有效的治疗策略至关 重要。     

人脐带间充质干细胞对大鼠创伤性脑损伤后血脑屏障的保护

背景:人脐带间充质干细胞在创伤性脑损伤后血脑屏障修复过程中发挥着至关重要的作用。目的:探讨人脐带间充质干细胞移植对创伤性脑损伤大鼠血脑屏障的保护作用及可能机制。方法:①将60只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤模型组、人脐带间充质干细胞组及抑制剂Sunitinib组,每组15只。除假手术组外,其他3组采用大鼠可控性皮质撞击仪制作创伤性脑损伤模型;②造模后0.5,24,48 h,假手术组、脑损伤模型组大鼠经尾静脉注射1 mL生理盐水,人脐带间充质干细胞组、抑制剂Sunitinib组大鼠经尾静脉注射2×10^9 L^-1人脐带间充质干细胞1 mL,抑制剂Sunitinib组大鼠从造模前1 d开始至处死每天按80 mg/kg的剂量口服PDGFR-β通路抑制剂Sunitinib;③造模后3 d,利用干湿比重法计算各组大鼠脑组织含水量,伊文思蓝法检测血脑屏障的通透性,免疫荧光染色观察GFAP和vWF的表达,Western blot检测血脑屏障相关蛋白及PDGFR-β蛋白的表达。结果与结论:①与假手术组比较,脑损伤模型组的脑含水量、伊文思蓝含量、vWF和GFAP表达明显升高(P<0.05),ZO-1、Oclaudin-5、PDGFR-β蛋白表达明显降低(P<0.05);②与脑损伤模型组比较,人脐带间充质干细胞组的脑含水量、伊文思蓝含量、vWF和GFAP表达明显降低(P<0.05),ZO-1、Oclaudin-5、PDGFR-β蛋白表达明显升高(P<0.05);使用PDGFR-β抑制剂后人脐带间充质干细胞的治疗作用被明显抑制;③结果表明人脐带间充质干细胞可以降低创伤性脑损伤大鼠血脑屏障的通透性,发挥神经保护作用,其作用机制可能是其提高了损伤区PDGFR-β蛋白的表达。