miRNA在绝经后骨质疏松症肾阴虚证中的表达谱特征及生物信息学分析

目的探讨绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)肾阴虚证miRNA的表达谱特征,及对差异表达的miRNA进行生物信息学分析。方法随机选择绝经后骨质疏松症受试者,中医辨证,分为3组:PMOP肾阴虚组3例,PMOP肾阳虚组3例,健康绝经后妇女3例作为对照组。采用人miRNA芯片检测外周血单个核细胞miRNA的表达水平。肾阴虚证组分别与其他两组比较,筛选共同的差异表达基因,实时荧光定量PCR验证芯片结果,并对差异表达的miRNA进行pathway分析及靶基因预测。结果肾阴虚证组与对照组、肾阳虚证组两组比较,筛选出20条共同差异表达miRNA;实时定量PCR验证hsa-miR-411-5p、hsa-miR-143-3p、hsa-miR-95-3p表达的结果与芯片结果相符;pathway分析结果显示,这些差异miRNA主要参与代谢通路、癌症通路、Rap1信号通路、粘着斑信号通路、PI3K-Akt、MAPK信号通路、钙离子信号通路、内质网蛋白加工、c GMP-PKG信号通路、Ras信号通路、Wnt信号通路的调控;结合多个数据库对差异表达的miRNA进行靶基因预测,最终筛选出9个靶基因(RC3H1、SOX11、FUT4、GABRA4、NUFIP2、ONECUT2、PHF20、PURB、ZNF148)。结论建立了PMOP肾阴虚证的miRNA基因表达谱,且这20个差异表达的miRNA可能通过调控PI3K-Akt、MAPK、Wnt等与骨代谢相关信号通路参与PMOP肾阴虚证的发生发展过程。     

续苓健骨颗粒治疗肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症的疗效及转录机制研究

探讨续苓健骨颗粒治疗肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症的临床疗效及转录组机制。方法 选取肾虚血瘀型绝经后骨质疏松症患者,随机分为续苓健骨颗粒试验组及骨化三醇对照组。观察两组中医证候积分、骨密度及安全性指标。取6例试验组患者治疗前、后的外周血进行转录组测序,另选6例健康组作为对照,筛选差异表达基因并行KEGG分析。结果 完成病例：试验组27例,对照组27例。试验组中医证候疗效总有效率为96.30 %,显著优于对照组的77.78 %（P?0.05）。治疗后两组中医证候积分、腰脊刺痛、下肢痿软等临床症状评分较治疗前均下降（P<0.05）,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。两组治疗前后骨密度比较差异无统计学意义（P>0.05）,但均保持稳定或呈现上升趋势。两组均未出现严重不良反应。转录组测序：试验组治疗前、后有319个差异基因;试验组治疗前与健康组有598个差异基因,其中19个差异基因（包括FOSB、H4C2、RAMP3等）在治疗后其表达显著改变。KEGG分析结果表明,FOSB参与破骨细胞分化、IL-17信号通路。结论 续苓健骨颗粒治疗绝经后骨质疏松症,能够显著改善临床症状,中医证候疗效优于骨化三醇,其作用机制可能与FOSB、RAMP3、H4C2基因及FOSB参与的破骨细胞分化、IL-17信号通路相关。     

骨碎补-续断药对对成骨/破骨代谢的双向调控作用及其对Hif1ɑ基因的影响

目的 分析骨碎补-续断药对对成骨/破骨代谢的调控作用并初步探讨其机制。方法 分别制备空白、低剂量、中剂量及高剂量的骨碎补-续断含药血清。采用CCK-8法、ALP染色法和茜素红染色法,分别观察含药血清对MC3T3-E1细胞增殖、成骨和矿化能力的影响;采用CCK-8法和TRAP染色法观察含药血清对RAW264.7细胞增殖和破骨分化能力的影响。采用系统药理学的方法分析药物的可能作用靶点,并结合RT-PCR和Western-blot的方法验证。结果 中剂量和高剂量骨碎补-续断含药血清可促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制RAW264.7细胞的增殖,中剂量组和高剂量组间没有明显差异;同时,中、高剂量含药血清可促进MC3T3-E1细胞的ALP活性和钙化能力,抑制RAW264.7细胞的TRAP活性,中剂量和高剂量间没有显著性差异。骨碎补-续断药对的可能作用靶点涉及HIF1ɑ,RT-PCR和Western-blot结果证实中剂量含药血清可提高MC3T3-1细胞Hif1ɑ基因的mRNA和蛋白水平及RAW264.7细胞的HIF1ɑ蛋白水平。结论 骨碎补-续断药对具有促进成骨代谢,抑制破骨代谢的作用,HIF...     

续苓健骨方对去卵巢骨质疏松模型大鼠血液钙磷代谢的影响

目的研究续苓健骨方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度、骨微结构和血液钙磷代谢的影响。方法将40只6月龄雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、续苓健骨方组[12.71 g/(kg·d)]和碳酸钙组[104.19 mg/(kg·d)],假手术组仅切除卵巢周围脂肪,其余组行双侧卵巢切除术后建立骨质疏松模型。药物干预12周后取材,通过双能X线骨密度仪检测左侧胫骨骨密度,经Masson染色观察右侧胫骨组织显微结构,生化检测血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、血钙和血磷水平。结果与假手术组相比,模型组骨密度显著降低,骨小梁断裂稀疏、排列不规则,TRAP表达增加,血钙含量降低,血磷含量升高。与模型组相比,续苓健骨方组骨密度增加,骨小梁数量增加、排列较规则,TRAP表达降低,血钙含量升高,血磷含量降低。结论续苓健骨方可提高去卵巢骨质疏松大鼠胫骨骨密度并改善骨组织微结构,其机制可能与调控血钙磷代谢稳态有关。     

hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63 细胞OPG/RANKL系统表达的影响

目的探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响。方法通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验。实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化。结果荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80%以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义(P=0.0004);CLCF1 mRNA水平未见明显变化(P=0.0986);过表达组OPG(P=0.0384)、RANKL(P=0.0007)mRNA均有所上调,差异具有统计学意义(P0.05);Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调(P=0.0053);与对照组比较,过表达组OPG(P=0.0021)、RANKL(P=0.0002)蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低(P=0.0078),差异具有统计学意义(P0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义(P0.05)。结论hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值。     

基于德尔菲法的血瘀证自评量表条目筛选

目的 为制定血瘀证自评量表,筛选优化条目.方法 采用德尔菲(Delphi)法,在前期研究基础上编制血瘀证自评量表专家问卷调查表,分别向37位专家发送3次问卷调查,并对问卷结果进行分析.结果 第3次调查问卷发出12份,收回有效问卷12份,专家积极系数为100％,专家总体权威系数为83.7％,专家意见的总体协调系数W为0.334,P＜0.05.量表分不同病位6个维度,删除3个条目,确定52个条目.结论 专家代表性强,积极性高,权威程度协调性好,应用Delphi法对血瘀证自评量表条目筛选的结果可取.     

髋部几何力学结合骨折风险预测简易工具预测中老年妇女的骨折风险

文题释义：FRAX工具：是世界卫生组织于2007年推荐的一种评估骨折风险的新型软件工具,其作用主要用于临床上,评估有哪些患者有接受骨质疏松诊断和治疗的需要。此软件可以预测患者10年内有多大可能会发生骨折,其主要依据是骨折密度和骨折危险因子的情况,通过一系列大样本循证医学原始数据,骨折部位也很广,包括髋骨骨折百分率,以及全身主要部位的骨折百分率。FRAX工具的使用方法也较为简单,只需要访问官网或用苹果手机下载FRAX应用,在其中录入患者的性别、年龄、身高以及体质量即可。HSA分析软件：HSA分析软件是美国The Johns Hopkins University 大学 Thomas Beck教授多年来应用CT和双能X射线骨密度仪通过骨几何学特征及一些骨结构指标来研究髋关节近段骨强度,建立了相应的髋关节结构分析系统几何学模型,其作用主要用于了解骨几何力学特征,是用于科研和药物治疗研究的最领先的骨结构分析手段。美国The Johns Hopkins University 大学拥有其专利及商业注册,2006年2月美国Hologic公司与其签署协议在双能X射线数字化骨密度仪中独家使用HSA分析软件,透过骨密度扫描的髋部近端骨成像分析其几何力学的参数。 背景：髋部几何力学是基于双能X射线吸收测定法扫描的图像上进行分析髋部结构(皮质厚薄)的力学研究,可以更好地弥补骨密度的偏差。骨折风险预测简易工具(FRAX)可以将骨折概率与多种临床危险因子以及股骨颈的骨密度相结合,预测10年内髋骨骨折概率和10年内主要骨质疏松性骨折(脊椎、前臂、髋骨或肩部骨折)概率。 目的：分析中老年妇女髋部几何力学以及FRAX^@工具与骨折的相关性,探讨两者结合对中老年妇女脆性骨折风险预测的临床意义。 方法：回顾性研究1 089名中老年女性受试者,根据调查问卷分既往有骨折组225例和无骨折864例,双能X射线骨密度仪检测骨密度,HSA软件分析髋部几何力学参数：骨横截面积、横截面转动惯量、截面弯曲模量、皮质厚度和屈曲应力比数值;FRAX^@工具计算未来10年主要部位骨折率和髋部骨折率。研究获得福建省中医药研究院伦理委员会审批。结果与结论：①骨折组的年龄明显高于无骨折组;②2组髋部几何力学参数比较：无骨折组的腰椎骨密度、股骨颈骨密度、骨横截面积、横截面转动惯量、皮质厚度、截面弯曲模量均明显高于骨折组,而屈曲应力比低于骨折组,经Logistic回归分析,显示皮质厚度是骨折的保护因素(OR=0.000,95%CI：0.000-0.000);③不同年龄段FRAX计算分析,骨折组的未来10年主要部位骨折率、髋部骨折率均明显高于无骨折组;④结果说明,髋部几何力学与骨折发生有明显关联性,股骨颈皮质厚度是骨折发生的保护因素,FRAX^@分析对预测骨折发生具有临床指导价值,两者结合可以更好地预测骨质疏松性骨折的发生。 ORCID: 0000-0003-2135-2657(叶云金) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

基于文献调研的中医临床研究主要病证分析

目的:基于期刊公开发表的中医临床研究文献,总结中医临床研究的主要病证。方法:从中国知网(CNKI)和维普(VIP)数据库检索2007年1月-2013年6月发表的中医临床研究文献,对文献中研究的中医和西医病名、证型、证素规范化整理后,进行频数统计。结果:共纳入2 771篇文献。主要中医疾病依次为胸痹、眩晕、胃脘痛等;主要西医疾病依次为冠心病、非胰岛素依赖型糖尿病、高血压等;主要中医证型依次为气阴两虚、血瘀、肝肾阴虚等;主要病位证素依次为肾、脾、肝等;主要病性证素依次为气虚、血瘀、热等。结论:当前中医临床研究以西医辨病结合中医辨证最为普及;中医辨证参考标准不一是最大的难题;而证素辨证执简驭繁,能有效避开标准证型问题,将为中医临床诊疗与科研带来新的契机。     

长链非编码RNA GAS5在绝经后骨质疏松症肾阴虚证的表达及对骨免疫细胞因子的调控作用

目的 研究长链非编码RNA GAS5 (long non-coding RNA GAS5,lncRNA GAS5)在绝经后骨质疏松症（postmenopausal osteoporosis,PMOP）肾阴虚证的表达及其对骨免疫相关细胞因子的调控作用。方法 随机选择绝经后妇女,经骨密度检测和中医辨证分型,分为肾阴虚证组（38例）、肾阳虚证组（32例）和健康对照组（35名）。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测外周血单核细胞中lncRNA GAS5的表达。通过慢病毒介导的RNA干扰技术,抑制THP-1人单核细胞中lncRNA GAS5基因的表达,并应用细胞因子抗体芯片技术检测骨免疫相关细胞因子的表达变化。结果 与对照组比较,lncRNA GAS5在PMOP肾阴虚证组和肾阳虚证组的表达水平均明显降低（P<0.01）;与肾阳虚证组比较,肾阴虚证组lncRNA GAS5的降低趋势更明显（P<0.05）;RNA干扰抑制lncRNA GAS5表达后,与对照组比较,干扰组lncRNA GAS5的表达下调67.58%,而白细胞介素(IL-6、IL-7、IL-17)、转化生长因子β(TGF-β1)、集落刺激因子（G-CSF 、M-CSF）等23种骨代谢相关细胞因子的表达水平显著上调,重组人巨噬细胞炎症蛋白-1β（MIP-1b）、白细胞介素1 b （IL-1 b）、胞间黏附分子-1（ICAM-1）等3种因子的表达下调。结论 lncRNA GAS5在PMOP肾阴虚证中低表达;体外抑制lncRNA GAS5的表达可影响骨免疫相关细胞因子水平。     

续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1细胞分化及增殖的影响

目的探讨续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1成骨细胞分化及增殖的影响。方法制备续苓健骨汤含药血清,实验分为空白对照组、含药血清低剂量组、中剂量组和高剂量组。采用CCK-8法和流式细胞术检测续苓健骨汤含药血清对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;碱性磷酸酶(ALP)活性测定MC3T3-E1细胞的成骨分化能力;茜素红染色检测MC3T3-E1细胞的矿化能力;实时荧光定量PCR检测成骨分化基因Runx2、OC、Bmp2、Col1a1mRNA水平。结果与空白对照组比较,中、高剂量续苓健骨汤含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖、S期细胞比率和细胞增殖指数,并且呈现一定的剂量依赖性;同时中高剂量续苓健骨汤含药血清组能明显提高MC3T3-E1细胞ALP活性(P0.01)和钙化能力(P0.01),促进Runx2、OC、Bmp2、Col1a1 mRNA的表达(P0.05)。结论续苓健骨汤含药血清能促进成骨细胞MC3T3-E1的增殖,并通过上调骨形成相关基因Runx2、OC、BMP2、Col1a1的表达水平,提高MC3T3-E1细胞的成骨能力。