PDTC对AD模型小鼠海马区Tau蛋白及胶质细胞的影响

目的:探讨吡咯烷二硫代甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对AD模型小鼠海马区Tau蛋白及胶质细胞的影响。方法:40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、Aβ组、Aβ+6 mg/L PDTC组和Aβ+8 mg/L PDTC组,每组各8只动物。Aβ组小鼠通过单侧海马注射Aβ1-42进行造模,对侧侧脑室注射生理盐水;PDTC处理组小鼠单侧海马注射Aβ1-42,对侧侧脑室内注射PDTC进行干预。采用免疫组织化学方法检测小鼠海马区S100β的表达情况,银染法检测小鼠海马齿状回Tau蛋白的表达情况,采用Western Blot法检测小鼠大脑海马区CD11b、p-Tau(S404)及GFAP蛋白的表达情况。结果:免疫组织化学实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠整个海马区星形胶质细胞标记物S100β阳性细胞的表达显著增加(P0.01);给予不同浓度PDTC处理后,S100β阳性细胞的表达减少(P0.05)。银染法实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠海马齿状回Tau蛋白阳性细胞的表达显著增加(P0.01);给予不同浓度PDTC处理后,Tau蛋白阳性细胞的表达减少(P0.05)。Western Blot实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠大脑海马区CD11b、p-Tau(S404)及GFAP蛋白表达均增多(P0.05)。给予不同浓度PDTC处理后,CD11b蛋白表达显著增多(P0.01);p-Tau(S404)和GFAP蛋白表达均减少(P0.05)。结论:PDTC可减少AD模型小鼠海马区Tau蛋白与星形胶质细胞表达;增加小胶质细胞的表达,其相关机制仍需进一步的研究。     

大鼠脑髓鞘坚牢蓝染色的两种不同复染方法比较

正在中枢神经系统中,髓鞘是由少突胶质细胞的突起缠绕神经元轴突所形成的管状节段性结构,其主要成分是70%脂类和30%蛋白质构成的鞘磷脂结构~([1]),而有髓神经纤维是大脑白质的重要组成部分。目前,检测髓鞘脂类表达的方法有多种,其中劳克坚牢蓝(luxol fast blue,LFB)染色是一种较为常用的髓鞘染色方法~([2-3])。但LFB染色也有不同的复染方法,其染色效果亦有差异。本研究通过对成年鼠和幼鼠2种不同鼠龄阶段的大脑髓鞘LFB染色,比较焦油紫和伊红2种不同复染方法的优缺点,为相关研究提供合适的染色方法。     

丙烯酰胺暴露对幼鼠胼胝体PLP和MBP表达的影响

目的:检测断乳期幼鼠胼胝体髓鞘蛋白PLP和MBP的表达,探讨丙烯酰胺(acrylamide,ACR)染毒对幼鼠胼胝体部髓鞘发育的影响。方法:断乳期幼鼠随机分为对照组(0 mg/kg)、低(18 mg/kg)和高(36 mg/kg)剂量组,每组12只,从出生后第22~42 d进行灌胃染毒。观测幼鼠步态的变化,用免疫组化方法和免疫荧光双标记法检测幼鼠胼胝体髓鞘蛋白脂蛋白(myelin PLP,PLP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达。结果:ACR染毒后幼鼠的步态评分均增加,差异有统计学意义(P0.01),免疫组织化学检测结果显示,与对照组相比较,ACR高剂量组幼鼠大脑PLP和MBP表达减少,差异有统计学意义(P0.05)。免疫荧光双标技术检测结果与免疫组织化学检测结果一致,即ACR染毒后胼胝体PLP和MBP均表达减少。结论:ACR染毒可能会通过减少PLP和MBP的表达,抑制胼胝体髓鞘的形成而影响神经系统发育。     

D-serine对阿尔茨海默病模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化的影响

目的:探讨D-丝氨酸(D-serine)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:42只SPF级昆明小鼠随机分为6组:Control组、Saline组、Aβ组、Aβ+D-serine组、Aβ+DAAO组、Aβ+BE组;每组7只动物。AD模型组小鼠双侧海马CA1区微量注射Aβ1-42造模,之后连续10 d分别腹腔注射生理盐水,D-serine(30 mg/kg),D-氨基酸氧化酶(DAAO)(30 mg/kg),苯甲酸钠(BE)(30 mg/kg)。采用免疫组织化学以及Western Blot方法检测各组小鼠海马区IL-1β、p-MAPT(S404)、p-GSK3β以及DCX表达的具体变化。结果:与Control组相比,Aβ组小鼠海马区IL-1β以及p-MAPT(S404)蛋白表达明显增多(P 0. 01),而p-GSK3β以及DCX蛋白表达明显减少(P 0. 01);而与Aβ组相比,Aβ+D-serine组IL-1β以及p-MAPT(S404)蛋白表达明显减少(P 0. 01); p-GSK3β以及DCX蛋白表达明显增多(P 0. 01)。结论:D-serine可以改善Aβ1-42诱导的AD模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化以及神经损伤。     

芦丁对丙烯酰胺染毒大鼠胼胝体髓鞘蛋白表达的影响

目的探讨芦丁(Rut)对丙烯酰胺(ACR)染毒大鼠胼胝体髓鞘碱性蛋白(MBP)及髓鞘蛋白脂蛋白(PLP)表达的影响。方法成年SD雄性大鼠32只,随机分为4组:对照组、20 mg/kg丙烯酰胺染毒组(ACR)、100mg/kg Rut保护组(R1+ACR)、200 mg/kg Rut保护组(R2+ACR),每组8只,灌胃21 d后取材。每周1次步态评分,观察大鼠的步态变化;免疫组织化学及Western blotting检测各组大鼠MBP及PLP表达量的变化。结果步态评分结果显示,与对照组相比,ACR组步态评分随染毒时间延长而增加,R1+ACR及R2+ACR组与对照组相比步态评分亦呈增加趋势,但与ACR组相比,步态评分明显降低(P<0.05);免疫组织化学及Western blotting结果显示,与对照组相比,ACR组胼胝体MBP及PLP的表达量均明显降低(P<0.01),与ACR组相比,R1+ACR及R2+ACR组MBP及PLP的蛋白表达量增加(P<0.05)。结论芦丁对丙烯酰胺染毒大鼠的髓鞘具有保护作用,这种保护作用可能与Rut抑制ACR染毒引起的胼胝体髓鞘蛋白MBP及PLP的减少有关。     

丙烯酰胺染毒对大鼠坐骨神经MBP和MAG表达的影响

目的:通过检测染毒大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)表达量的变化,探讨丙烯酰胺(ACR)对大鼠周围神经系统的毒性影响。方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、9、18、36 mg/kg ACR组,每组8只,灌胃染毒21 d后取材。每周一次步态评分,记录大鼠步态改变;利用HE染色和劳克坚牢蓝染色,观察坐骨神经及其髓鞘的改变;通过免疫组织化学方法检测蛋白MBP和MAG表达量的变化。结果:大鼠步态得分与染毒剂量和染毒时间呈正相关; HE染色显示随染毒剂量增大,坐骨神经神经纤维排列紊乱、髓鞘结构发生改变、轴突数目减少;劳克坚牢蓝染色结果显示与对照组相比,染毒组髓鞘染色较浅、着色不均,髓鞘变细;免疫组化结果显示,MBP和MAG在坐骨神经中的表达量均随染毒剂量增大而下降。结论:ACR染毒对大鼠坐骨神经髓鞘的毒性损伤,可能与MBP和MAG蛋白表达量的下降有关。