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目的 建立表达绿色荧光蛋白(GFP)的耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞模型,对耻垢分枝杆菌进行快速定位和直观检测,为探究结核发病机制以及研制新型结核疫苗提供一种示踪工具。方法 以pEGFP-N1质粒为模板采用PCR扩增出增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,获得EGFP的编码基因,将扩增产物克隆到载体pALACE上,建立重组质粒pALACE-EGFP。利用电穿孔技术将pALACE-EGFP转化到耻垢分枝杆菌中,通过潮霉素抗性筛选重组耻垢分枝杆菌克隆,扩大培养后涂片观察,并进行荧光显微镜镜检。再用重组耻垢分枝杆菌感染THP-1巨噬细胞,观察是否有GFP表达。结果 正确构建重组质粒pALACE-EGFP;荧光显微镜下观察重组耻垢分枝杆菌,证实EGFP在重组耻垢分枝杆菌中表达,并且THP-1巨噬细胞被感染后发出绿色荧光。结论 表达EGFP蛋白的重组耻垢分枝杆菌的成功建立,为结核分枝杆菌的感染和致病机制研究奠定基础。 相似文献
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目的制备积雪草苷-海藻酸钠修复贴(As-SA RP)并评价其对皮肤创伤修复的效果。方法利用海藻酸钠与Ca2+交联成膜的特点,以积雪草苷为药物模型,通过与海藻酸钠共混的方式成功制备了As-SARP,采用扫描电子显微镜及红外光谱考察共混膜的相容性,并用新西兰大耳兔背部脊柱两侧的全层皮肤建立创伤模型,通过观察各组家兔受损皮肤的愈合状况并测定其受损皮肤组织中胶原(羟脯氨酸作为指标)和促炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的表达水平以考察外敷As-SA RP对皮肤创面的修复效果。结果积雪草苷与海藻酸钠具有良好的相容性,可成功制备As-SA RP修复贴。相较于其他组,As-SA RP处理后皮肤受损处的红肿、出血、感染、渗出液情况明显减少,创面愈合率也相对升高。病理结构显示As-SA RP组家兔皮肤中炎性细胞浸润较少、新生的毛细血管较多、创面皮肤结构较完整且胶原纤维排列相对紧密有序。同时,生化分析结果显示As-SA RP能有效抑制受损皮肤组织中促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的高表达,并可明显增高其中羟脯氨酸及胶原纤维含量。结论 As-SARP可在一定程度上提升皮肤对积雪草苷的吸收,进而表现出比活性组分更好的皮肤损创伤修复效果。 相似文献
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背景：培养神经元的质量是研究中枢神经系统疾病的关键所在,但培养方法一直没有统一的标准。目的：探究取材部位及阿糖胞苷处理对原代培养神经元活性、纯度及成熟度的影响。方法：选取新生24 h内的SD乳鼠,取大脑皮质表面2.0-3.0 mm处细胞,培养后24,48,72 h,用5μmol/L或10μmol/L阿糖胞苷处理48 h;另取全部大脑皮质细胞,培养后48 h用5μmol/L阿糖胞苷处理48 h。培养至第7天,倒置显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8法检测阿糖胞苷对神经元活性的影响,免疫荧光和Western blot检测神经元的纯度及成熟度。结果与结论：（1）倒置显微镜：10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元密度分别低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组,该6组神经元突起相互之间均可连接成紧密的网状结构,神经元胞体丰满并充满折光特性;全皮质组细胞密度低于正常对照组,并可明显观察到非神经元;（2）CCK-8检测：各阿糖胞苷组细胞活性均低于正常对照组（P <0.001）, 10μmol/L阿糖胞苷24,48,72 h组神经元活性低于同时间下的5μmol/L阿糖胞苷组（P &... 相似文献
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