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目的:构建Sox2及突变体Sox2 K247R的真核表达载体, 并在293FT细胞中表达.方法:以含有Sox2基因全长的馈赠质粒为模板, 用循环延伸PCR法得到该基因的突变体Sox2 K247R, 并将野生型及突变型基因定向亚克隆到真核表达载体pCMV-HA上.得到的重组质粒经限制性内切酶消化和DNA测序鉴定.其后用脂质体包埋法将pCMV-HA-Sox2及pCMV-HA-Sox2 K247R分别单独转染或与pCMV-Myc-SUMO1共转染293FT细胞.采用Western blot分析蛋白表达情况及SUMO修饰情况.结果:经酶切和DNA序列测定, 重组子序列正确, 突变体第247位密码子由AAG转变为CGG.Western blot结果显示野生型及突变型的Sox2都在细胞内得到了很好的表达, SUMO修饰位点突变后, Sox2不能与SUMO蛋白结合.结论:Sox2野生型及突变型真核表达载体构建成功, 在蛋白水平体现了SUMO修饰的差异性. 相似文献
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