PDTC对AD模型小鼠海马区Tau蛋白及胶质细胞的影响

目的:探讨吡咯烷二硫代甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对AD模型小鼠海马区Tau蛋白及胶质细胞的影响。方法:40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、Aβ组、Aβ+6 mg/L PDTC组和Aβ+8 mg/L PDTC组,每组各8只动物。Aβ组小鼠通过单侧海马注射Aβ1-42进行造模,对侧侧脑室注射生理盐水;PDTC处理组小鼠单侧海马注射Aβ1-42,对侧侧脑室内注射PDTC进行干预。采用免疫组织化学方法检测小鼠海马区S100β的表达情况,银染法检测小鼠海马齿状回Tau蛋白的表达情况,采用Western Blot法检测小鼠大脑海马区CD11b、p-Tau(S404)及GFAP蛋白的表达情况。结果:免疫组织化学实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠整个海马区星形胶质细胞标记物S100β阳性细胞的表达显著增加(P0.01);给予不同浓度PDTC处理后,S100β阳性细胞的表达减少(P0.05)。银染法实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠海马齿状回Tau蛋白阳性细胞的表达显著增加(P0.01);给予不同浓度PDTC处理后,Tau蛋白阳性细胞的表达减少(P0.05)。Western Blot实验结果显示:与对照组比较,Aβ组小鼠大脑海马区CD11b、p-Tau(S404)及GFAP蛋白表达均增多(P0.05)。给予不同浓度PDTC处理后,CD11b蛋白表达显著增多(P0.01);p-Tau(S404)和GFAP蛋白表达均减少(P0.05)。结论:PDTC可减少AD模型小鼠海马区Tau蛋白与星形胶质细胞表达;增加小胶质细胞的表达,其相关机制仍需进一步的研究。     

D-serine对阿尔茨海默病模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化的影响

目的:探讨D-丝氨酸(D-serine)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化的影响。方法:42只SPF级昆明小鼠随机分为6组:Control组、Saline组、Aβ组、Aβ+D-serine组、Aβ+DAAO组、Aβ+BE组;每组7只动物。AD模型组小鼠双侧海马CA1区微量注射Aβ1-42造模,之后连续10 d分别腹腔注射生理盐水,D-serine(30 mg/kg),D-氨基酸氧化酶(DAAO)(30 mg/kg),苯甲酸钠(BE)(30 mg/kg)。采用免疫组织化学以及Western Blot方法检测各组小鼠海马区IL-1β、p-MAPT(S404)、p-GSK3β以及DCX表达的具体变化。结果:与Control组相比,Aβ组小鼠海马区IL-1β以及p-MAPT(S404)蛋白表达明显增多(P 0. 01),而p-GSK3β以及DCX蛋白表达明显减少(P 0. 01);而与Aβ组相比,Aβ+D-serine组IL-1β以及p-MAPT(S404)蛋白表达明显减少(P 0. 01); p-GSK3β以及DCX蛋白表达明显增多(P 0. 01)。结论:D-serine可以改善Aβ1-42诱导的AD模型小鼠海马区tau蛋白过度磷酸化以及神经损伤。     

淫羊藿苷通过调节PGRN表达减轻L-谷氨酸诱导的HT22细胞损伤

目的:研究淫羊藿苷(Icariin,ICA)对L-谷氨酸诱导HT22细胞损伤的保护作用及对颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)表达的影响。方法:应用CCK-8法检测不同浓度L-谷氨酸(0、2.5、5、10、20、40、80 mmol/L)诱导HT22细胞损伤24 h后细胞存活率,确定L-谷氨酸对细胞损伤的浓度;CCK-8法确定淫羊藿苷对HT22细胞的无毒范围及不同浓度淫羊藿苷对L-谷氨酸诱导的HT22细胞存活率下降的影响;免疫组织化学法检测PGRN在HT22正常细胞中的表达;免疫荧光法和蛋白质印迹法检测淫羊藿苷对PGRN在HT22细胞中表达的影响。结果:确立10 mmol/L L-谷氨酸与HT22细胞共孵育24 h为损伤模型的实验条件;淫羊藿苷实验浓度范围内HT22细胞存活率无明显下降;加入淫羊藿苷与L-谷氨酸共孵育后,HT22细胞存活率出现明显上升,且具有显著性差异(P0.001);PGRN在HT22细胞的胞浆和突起中有明显表达;免疫荧光法和蛋白质印迹法均表明不同浓度淫羊藿苷影响PGRN在L-谷氨酸诱导HT22细胞损伤模型中的表达,且随着淫羊藿苷浓度增加,PGRN表达量增加。结论:高浓度L-谷氨酸对HT22细胞具有明显的损伤作用,且呈剂量依赖性,而淫羊藿苷可发挥保护作用,显著提高细胞存活率。淫羊藿苷可能通过调节PGRN的表达从而缓解L-谷氨酸诱导的HT22细胞损伤。     

石菖蒲挥发油对炎症痛大鼠基底外侧杏仁核中胶质纤维酸性蛋白和即刻早期基因表达的影响

目的 通过注射完全弗氏佐剂(CFA)构建炎症痛大鼠模型,探讨石菖蒲挥发油对炎症痛大鼠基底外侧杏仁核(BLA)中神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和即刻早期基因(c-fos)表达的影响。方法 成年SD雄性大鼠36只,随机分为6组: 对照（control）组、假手术（sham）组、CFA组、CFA+5 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组、CFA+10 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组、CFA+20 g/(kg ·d)石菖蒲挥发油组,每组各6只动物,于灌胃21 d后取材。采用免疫荧光及Western blotting技术检测各组大鼠BLA中GFAP和c-fos表达量的变化。结果 免疫荧光及Western blotting结果均显示,与control组相比,CFA组大鼠BLA中GFAP及c-fos阳性表达均显著增多(P<0.01);与CFA组相比,石菖蒲挥发油处理组GFAP和c-fos阳性表达均降低,且表达量呈剂量依赖性递减(P<0.01);其中,高剂量组GFAP和c-fos阳性表达的下降趋势较低剂量组相比更为显著(P<0.01)。结论 石菖蒲挥发油可减少CFA诱导的炎症性疼痛大鼠BLA中星形胶质细胞表达,并进一步抑制c-fos的表达。     

丙烯酰胺染毒对大鼠坐骨神经MBP和MAG表达的影响

目的:通过检测染毒大鼠坐骨神经中髓鞘碱性蛋白(MBP)和髓磷脂相关糖蛋白(MAG)表达量的变化,探讨丙烯酰胺(ACR)对大鼠周围神经系统的毒性影响。方法:成年雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、9、18、36 mg/kg ACR组,每组8只,灌胃染毒21 d后取材。每周一次步态评分,记录大鼠步态改变;利用HE染色和劳克坚牢蓝染色,观察坐骨神经及其髓鞘的改变;通过免疫组织化学方法检测蛋白MBP和MAG表达量的变化。结果:大鼠步态得分与染毒剂量和染毒时间呈正相关; HE染色显示随染毒剂量增大,坐骨神经神经纤维排列紊乱、髓鞘结构发生改变、轴突数目减少;劳克坚牢蓝染色结果显示与对照组相比,染毒组髓鞘染色较浅、着色不均,髓鞘变细;免疫组化结果显示,MBP和MAG在坐骨神经中的表达量均随染毒剂量增大而下降。结论:ACR染毒对大鼠坐骨神经髓鞘的毒性损伤,可能与MBP和MAG蛋白表达量的下降有关。