ALYREF对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

目的 探讨ALYREF在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 利用TCGA数据库分析ALYREF在肺腺癌中的表达及其与预后的关系;应用免疫组化验证肺腺癌及其癌旁组织中ALYREF的表达水平。构建沉默ALYREF的A549和H1299稳转细胞株;通过RTCA和克隆形成实验检测细胞增殖,采用Transwell实验评估细胞迁移,运用Western blot检测增殖、迁移及EMT相关蛋白的表达水平。RNA-seq测序沉默ALYREF的A549细胞及对照细胞,进行GO/KEGG通路富集分析,分析ALYREF可能参与的功能通路,并通过功能回复实验进行验证。结果 TCGA数据库分析结果显示：ALYREF在肺腺癌组织中显著高表达(P<0.001);高表达ALYREF患者的总生存期(overall survival, OS)更短(P<0.05)。沉默ALYREF可以抑制A549和H1299细胞的增殖、迁移和EMT进程。RNA-seq测序显示：差异表达基因在TGF-β通路富集最明...     

MCDA-LFB检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度、最佳扩增时间选择及评估

目的 筛选多交叉置换扩增技术（MCDA）结合纳米生物传感条（LFB）检测肺炎克雷伯菌的最佳扩增温度、最佳扩增时间，并对MCDA-LFB法检测肺炎克雷伯菌的效果进行评估。方法 根据肺炎克雷伯菌特异的保守基因rcsA的核苷酸序列，采用Primer Premier Version 5.0软件设计一套特异性MCDA引物，其中交叉引物CP1和扩增引物C1分别标记异硫氰酸荧光素（FITC）和地高辛（Dig），建立25μL的MCDA反应体系。将温度按60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃依次递增，分别扩增1 h，然后85℃加热5 min后终止反应，使用实时浊度仪观察DNA浓度曲线，绘制MCDA扩增反应动力学图，确定最佳扩增温度。在筛选出的最佳扩增温度下，选择10 min、20 min、30 min和40 min 4个时间点分别对10 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL、100 fg/μL、10 fg/μL和1 fg/μL的肺炎克雷伯菌DNA进行MCDA扩增，使用LFB进行检测，根据LFB检测结果确定最佳扩增时间。使用MCDA-LFB法检测36株肺...