靶向调控TOX3基因对乳腺癌细胞增殖及周期的影响

目的 研究TOX3基因对人乳腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法 采用Western blot法检测已构建的稳定沉默TOX3的ZR-75-1细胞和稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。MTT法检测过表达和干扰TOX3基因对乳腺癌细胞增殖活性的影响。平板单克隆实验检测过表达TOX3对MDA-MB-231细胞单克隆形成能力的影响,流式细胞术检测沉默或过表达TOX3后ZR-75-1和MDA-MB-231细胞周期的变化。结果 与阴性对照组比较,稳定沉默TOX3的乳腺癌ZR-75-1细胞TOX3蛋白表达明显下降,过表达TOX3的MDA-MB-231细胞TOX3蛋白表达明显上调。过表达TOX3后,MDA-MB-231细胞的增殖活性明显增强,单克隆形成能力增强,G₀/G₁期细胞所占比例明显减少,G₂/M期细胞比例增多。干扰TOX3后,ZR-75-1细胞增殖活性下降,G₀/G₁期细胞比例增加,G₂/M期细胞比例减少。结论 靶向调控TOX3基因的表达可改变乳腺癌细胞增殖和单克隆形成能力,影响乳腺癌细胞周期。     

岩大戟内酯B的抗肿瘤活性及其分子机制研究进展

岩大戟内酯B（jolkinolide B,JB）是从狼毒大戟根部分离出的二萜类化合物。大量研究表明,JB具有抗肿瘤、抗炎、抗骨质疏松和抗结核等多种药理活性。JB的药理作用主要集中于抗肿瘤,是一种毒性较低的天然抗肿瘤药物,受到学者的广泛关注。本文对JB的抗肿瘤活性及其分子机制研究进展进行综述,以期为JB生物学功能的探究及抗肿瘤药物的开发提供理论基础。     

葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠的神经保护作用及机制研究

目的:探讨葛根素对围绝经期抑郁症模型小鼠行为影响及神经生物学机制。方法:清洁级昆明小鼠饲养1周以适应环境。旷场实验(OFT)筛选后,随机分为假手术组、围绝经期抑郁症模型组、氟西汀组(FLU,3mg/kg)、雌激素组(E,0.15 mg/kg)和葛根素组(92 mg/kg),每组10只。采用小鼠双侧卵巢切除(OVX)联合慢性不可预知性温和应激(CUMS)法建立围绝经期抑郁症动物模型。各给药组于每日应激前1 h灌胃给药,其余各组给予等体积生理盐水,共计21 d。观察小鼠动情周期变化,测定行为学变化,观察海马组织形态学改变,测定脑组织单胺类递质含量,测定海马组织c AMP反应元件结合蛋白(CREB)-脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路主要蛋白表达。结果:与假手术组比较,各OVX组小鼠连续7 d内连续监测未见动情周期变化,证明去势成功;围绝经期抑郁症模型组小鼠呈现抑郁样行为,表现为自发活动及探索行为减少、行为绝望时间增加、体质量增长缓慢(P0.01或P0.05),海马神经元损伤、萎缩、数量减少、尼氏体减少及早期凋亡变化,脑组织五羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)及多巴胺(DA)含量减少(P0.01);海马组织CREB-1、磷酸化c AMP反应元件结合蛋白(p-CREB-1)、BDNF及酪氨酸蛋白激酶B(Trk B)蛋白表达减少(P0.01)。与围绝经期抑郁症模型组比较,给予葛根素(Pue)治疗后,可改善围绝经期抑郁症模型小鼠抑郁样行为,表现为增加自发活动及探索行为、减少行为绝望时间、体质量增加迅速(P0.01或P0.05);减轻海马组织神经元损伤及凋亡细胞,增加脑组织5-HT、NE及DA含量(P0.01),增加海马组织CREB-1、p-CREB、BDNF及Trk B蛋白表达(P0.01),差异具有统计学意义。结论:采用小鼠双侧OVX联合CUMS可成功制备围绝经期抑郁症动物模型。葛根素具有神经保护及抗围绝经期抑郁症作用,其机制主要通过减轻海马神经元损伤、抑制神经元早期凋亡、增加脑组织单胺类递质含量及上调脑组织CREB-BDNF信号通路主要蛋白表达而发挥的。     

乳腺癌中蛋白高乙酰化/琥珀酰化水平及其同组蛋白2AX高表达的相关性

目的 明确乳腺癌中蛋白乙酰化/琥珀酰化修饰和组蛋白2AX(H2AX)表达水平,并确认两者之间是否具有相关性.方法 Western blotting及RT-PCR方法检测11例乳腺癌组织和细胞中蛋白修饰和H2AX表达水平,并利用组蛋白去乙酰化酶抑制剂初步明确乙酰化和琥珀酰化可能存在的共同调控方式;载体构建及过表达方法明确...     

内皮素受体B基因过表达对乳腺癌ZR-75-1细胞活力和周期的影响

目的 探讨过表达内皮素受体B(EDNRB)基因对人乳腺癌ZR-75-1细胞活力和细胞周期的影响。方法 设计EDNRB基因特异性引物,与GV492载体连接构建含EDNRB基因全长序列的过表达载体,慢病毒包装后转染ZR-75-1细胞,构建稳定过表达EDNRB的乳腺癌细胞系。用半定量逆转录聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测EDNRB mRNA和蛋白的表达水平,用噻唑蓝法检测EDNRB过表达对细胞生长的影响,用流式细胞术检测EDNRB过表达对细胞周期的影响,用蛋白质印迹法检测EDNRB过表达对细胞周期相关蛋白表达的影响。结果 未处理组、GV492转染组和GV492-EDNRB转染组的EDNRB mRNA表达水平分别为0.22±0.13、0.13±0.10和1.79±0.12,EDNRB蛋白相对表达水平分别为0.75±0.04、0.80±0.21和1.43±0.10,GV492-EDNRB转染组的上述指标与未处理组和GV492转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。未处理组和GV492-EDNRB转染组的细胞存活率分别为0.98±0.58和0.62±0.15,G1期细胞百分比分别为(...     

天麻素联合异钩藤碱抑制MPP~+诱导的PC12细胞凋亡的抗氧化机制

天麻-钩藤药对是临床治疗帕金森病出现频次最高的药对,天麻素和异钩藤碱是天麻-钩藤药对抗帕金森病的主要有效成分。为了观察天麻素联合异钩藤碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP⁺)诱导的PC12细胞凋亡的影响及探讨其抗氧化机制,该研究采用分光光度法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染法检测细胞周期分布,分光光度法检测脂质过氧化物(lipid peroxidation,LPO)含量,实时定量PCR法检测细胞caspase-3 mRNA表达,免疫印迹法检测血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)和醌氧化还原酶-1(NADPH:quinone oxidore-ductase 1,NQO-1)蛋白表达。结果发现,天麻素联合异钩藤碱显著降低MPP⁺诱导的PC12细胞FITC-Annexin V阳性细胞比率和细胞周期阻滞,显著下调MPP⁺诱导的PC12细胞caspase-3 mRNA表达,显著降低MPP⁺诱导的PC12细胞LPO含量,上调HO-1和NQO-1蛋白表达。值得注意的是,天麻素联合异钩藤碱的这些药理作用可被细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)抑制剂PD98059、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制剂LY294002或/和糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)抑制剂氯化锂预处理逆转,提示天麻素联合异钩藤碱通过ERK1/2和PI3K/GSK-3β信号通路抑制MPP⁺诱导的PC12细胞凋亡和氧化应激。结果表明,天麻素联合异钩藤碱上调MPP⁺诱导的PC12细胞HO-1和NQO-1蛋白表达,进而减少氧化应激,抑制其凋亡。     

乳腺癌细胞PCDH10基因启动子甲基化与信使RNA表达相关性研究北大核心CSCD

目的探讨原钙黏蛋白10(PCDH10)在人乳腺癌细胞中的信使RNA(mRNA)表达和甲基化状态及其相互关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中,收集乳腺癌患者的正常乳腺组织和癌组织PCDH10的mRNA和甲基化数据,用UALCAN在线工具进行分析。亚硫酸盐测序法(BSP)检测乳腺癌细胞中PCDH10基因启动子甲基化状态,反转录-PCR法检测PCDH10基因表达水平。用5-氮杂胞苷(5-Aza-CR)和/或曲古抑菌素A(TSA)处理后,检测MDA-MB-231细胞中PCDH10基因表达。结果正常乳腺组织和癌组织的mRNA均值分别为0.14和5.8×10-2;这2种组织的启动子甲基化水平分别为5.9×10-2和0.20。MDA-MB-231、MCF-7、ZR-751和Bcap37细胞甲基化率分别为85.88%,67.65%,67.06%和78.82%,这4种细胞mRNA表达水平分别为(0.7±0.1)×10-2,(46.8±3.4)×10-2,(38.1±2.9)×10-2,(0.5±0.1)×10-2。未处理组、5-Aza-CR处理组、TSA处理组和5-Aza-CR+TSA处理组mRNA表达水平分别为(1.1±0.2)×10-2,(52.4±4.8)×10-2,(48.4±3.9)×10-2,(102.4±9.4)×10-2。上述指标:正常组织与乳腺癌组织相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);MDA-MB-231、Bcap37和MCF-7、ZR-75-1相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);与未处理组比较,5-Aza-CR处理组、TSA处理组和5-Aza-CR+TSA处理组均有统计学意义(均P<0.05)。结论乳腺癌细胞中PCDH10基因启动子区频繁甲基化与其mRNA低表达或缺失有关,其基因表达可被去甲基化药物逆转。     

4株乳腺癌细胞中内皮素受体B基因的甲基化状态及对MCF-7细胞增殖的影响

目的 探讨内皮素受体B（EDNRB）基因在4株乳腺癌细胞中的表达、甲基化状态以及恢复EDNRB表达对MCF-7细胞增殖的影响。 方法 采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）和亚硫酸盐测序法（BSP）分析4株乳腺癌细胞中EDNRB的甲基化状态;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测EDNRB mRNA的表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和集落形成实验检测EDNRB表达恢复对MCF-7细胞增殖的影响。 结果 EDNRB在乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-1中表达缺失,并呈高甲基化状态;而在EDNRB表达最高的MDA-MB-231细胞中其启动子呈低甲基化,表明乳腺癌细胞中EDNRB基因启动子甲基化状态与其表达成负相关。5-氮杂胞苷（5-Aza-CR）能够反转EDNRB基因的表达,EDNRB表达恢复后MCF-7细胞的增殖受到抑制。 结论 EDNRB基因启动子区CpG岛频繁甲基化可能在乳腺癌发生发展中发挥重要作用,EDNRB有望成为乳腺癌早期诊断的新的分子标志物。