HLCDG1基因siRNA表达质粒的构建及其对A549细胞周期和增殖的影响

目的:本研究旨在应用RNA干扰技术，诱导转基因肺癌细胞HLCDG1基因沉默并观察其对肺癌细胞周期和增殖的影响。 方法:构建HLCDG1基因短小干扰双链RNA表达载体，筛选HLCDG1基因表达沉默的肺癌细胞株并应用MTT和流式细胞仪分析这一肺癌细胞株增殖和细胞周期分布状况。 结果:根据siRNA表达载体的设计原则，构建了能在哺乳动物细胞稳定表达的siRNA载体5个（4个位点匹配实验组和1个位点错配对照组），依次命名为pHL-si-1、pHL-si-2、pHL-si-3、pHL-si-4 和 pHL-si-c。上述载体分别与表达HLCDG1的重组体pcDNA3.1(+)/HLCDG1共转染A549细胞，筛选到一株共转染pHL-si-1载体和pcDNA3.1(+)/HLCDG1重组体的A549细胞，它几无HLCDG1基因表达，这株细胞暂命名为A549-HLCDG1-si-1。MTT和流式细胞仪分析表明，A549-HLCDG1-si-1细胞增殖能力明显提高，进入S期和G2+M期增多，滞留G1期减少。 结论:采用RNAi技术特异阻断HLCDG1基因表达，验证了HLCDG1基因对A549肺癌细胞有生长抑制作用。     

利用CRISPR/Cas9技术构建人TCRP1基因敲除慢性髓系白血病K562细胞系及其生物学功能检测

目的选取人慢性髓系白血病(CML)细胞K562为实验对象, 利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除舌癌耐药相关蛋白1(TCRP1)基因的CML细胞系K562/TCRP1-KO, 通过细胞增殖、细胞凋亡、药物敏感性等功能试验比较K562/TCRP1-KO与对照细胞(K562/cas9-CTL)的表型差异, 初步探讨TCRP1基因参与CML发病的可能机制。方法在特定位点设计针对TCRP1的小向导RNA(sgRNA), 寡核苷酸片段退火后与线性化的Cas9表达载体重组, 慢病毒包装系统转染293T细胞, 收集纯化病毒感染K562细胞, 嘌呤霉素加压筛选阳性多克隆, 有限稀释法进一步筛选出单克隆K562/TCRP1-KO, Sanger测序和Western blot检测成功敲除的稳定细胞株, 同时构建转染lentiCRISPR载体的K562细胞作为对照细胞株(K562/cas9-CTL), 采用细胞计数法、CCK8法及伊马替尼(IM)梯度稀释法、流式细胞术分别对K562/TCRP1-KO和K562/cas9-CTL进行细胞增殖、药物敏感性及细胞凋亡分析。结果成功构建了用...     

两种降钙素原检测方法的比对试验及偏倚估计

目的比较SNIBE PCT检测和VIDAS Brahms PCT检测结果之间的相关性和一致性,估计SNIBE PCT检测结果在检测阈值处的偏倚,从而评价SNIBE PCT检测结果能否用于临床诊断及疗效监控。方法收集107例就诊于深圳市儿童医院的患者血清标本,同一份患者的标本同时在SNIBE仪器和VIDAS仪器上检测。采用SPSS19.0统计软件计算相关系数r,回归方程Y=aX+b,对方程进行F检验,对方程系数进行t检验。结果经过计算r=0.9950.975,显著性检验结果显示,两种方法学显著相关。回归方程Y=0.969 X-0.075,F检验显示回归方程差异显著;对回归方程的两个系数进行t检验显示,截距差异无显著性而斜率的差异显著,说明两种方法存在一定的比例误差。PCT在检测阈值0.25、0.5μg/L处的预期偏倚分别为0.083、0.091μg/L,偏倚百分比分别为33.2%、18.1%。经过计算,偏倚小于5%的最低浓度为3.95μg/L。结论两种方法检测结果具有显著的相关性。回归方程差异显著,但二者存在一定的比例误差。SNIBE PCT在3.95~100.00μg/L范围内偏倚小于5%,可以用于临床疗效监控,但需要重新评价SNIBE PCT检测阈值及检测低限。     

某部医院消毒状况调查

为了解医院消毒状况 ,加强对消毒工作的指导和监控 ,我们对某部医院的消毒状况进行了调查。1　内容与方法　 (1 )内容 :医院消毒制度和医疗感染、消毒剂的配制、使用及保管 ;高压蒸汽消毒温度、医疗器具及工作间和病房消毒情况。 (2 )方法 :①高压蒸汽消毒温度及效果监测 :少量苯甲酸封于安瓿内 ,夹在灭菌物品中同时灭菌 ,灭菌完毕苯甲酸呈溶解再结晶 ,表示温度达 1 2 1℃ ,达到消毒目的 ;普通营养琼脂培养基同待消毒物一同灭菌后 37℃、2 4h细菌培养 ,无细菌生长为达到灭菌目的。②医疗器具消毒后细菌检验 :灭菌棉拭子在已消毒的医疗器具上…     

人源性抗HER2胞外段Fab噬菌体抗体库的构建及筛选

目的:构建全人源抗HER2胞外段(HER2 ECD)噬菌体Fab抗体库,从中筛选出特异性的抗体,并对其进行鉴定。方法:体外致敏并用EB病毒(EBV)转化HER2高表达乳腺癌患者的外周血单核细胞(PBMC),用PCR分别扩增重链Fd和轻链κ/λ基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建抗HER2 ECD人源化Fab噬菌体抗体库。以纯化HER2 ECD蛋白为抗原进行3轮固相淘选,富集抗HER2 ECD的抗体,并随机挑选克隆进行ELISA,获得的阳性克隆进一步以Western blot鉴定其抗原结合活性,对其中活性最高的克隆进行DNA测序。结果:构建了容量为2.5×107的抗HER2 ECD的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了4株与HE2 ECD特异性结合的阳性克隆,Western blot分析显示其与HER2 ECD能较好的结合。选取结合活性最高的阳性克隆进行DNA序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与人胚系免疫球蛋白基因有高度的同源性。结论:成功构建了全人源抗HER2 ECD噬菌体抗体库,并筛选出抗HER2 ECD特异性较强的噬菌体克隆,为获得新的有临床应用价值的HER2 ECD抗体提供了实验基础。     

DNA修复系统与肿瘤发生和治疗关系的研究进展

DNA修复是指细胞中受到损伤的DNA分子在多种酶的作用下恢复正常的DNA 序列结构和维持遗传信息相对稳定的细胞反应。DNA修复包括直接修复、碱基切除修复、错配修复、核苷酸切除修复和双链断裂修复等基本形式。DNA修复系统的异常可能导致肿瘤的发生,而且DNA修复基因的多态性使得其修复DNA的能力产生差异,从而影响了肿瘤的易感性和治疗的预后。本文通过查阅相关文献,对DNA修复系统与肿瘤发生和治疗的研究进展进行了综述。     

武警某部20年传染病流行病学分析

为了解驻湘武警某部传染病的发病特点及规律,加强传染病的防治,对该部1981～2000年传染病的发病情况进行分析,现报告如下:1 资料和方法 传染病资料均来自该部队医院及卫生队,分析方法采用描述流行病学现况分析研究方法。2 结果2.1 流行概况 二十年来,该部发生法定传染病12种,年均发病率6.2‰,干部年均发病率3.1‰,战士年均发病率     

PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用

目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β真核表达载体pcDNA3.1-PDGFR-β,将其转染至NIH 3T3细胞,获得稳定转染的细胞克隆,并对其进行功能学鉴定及应用;应用瞬时转染PDGFR-β的HeLa细胞,建立PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果在无血清培养条件下,稳定转染人PDGFR-β的NIH 3T3细胞获得了PDGF依赖性的细胞增殖特征;HeLa细胞经瞬时转染PDG-FR-β后,可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷酸化。通过应用已知PDGFR-β抑制剂及自行合成化合物,确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论所构建并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性,适用于较高通量的PDGFR-β和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。     

2HRZS（E）/4HR方案对肺结核合并乙肝病毒标志物阳性军人肝功能的影响

目的:观察2HRZS(E)/4HR方案对肺结核合并乙肝病毒标志物(HBVM)阳性军人肝功能的影响。方法:根据HBVM把212例肺结核军人分为HBVM阳性组(包括组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ)和阴性组,均使用2HRZS(E)/4HR方案进行治疗,对各组肺结核军人肝损害程度、出现时间和恢复时间进行比较。结果:HBVM阳性组肝损率明显高于HBVM阴性组(P<0.001),而HBVM阳性各组间无显著差异(P<0.05);与HBVM阴性组比较,HBVM阳性组肝损害程度严重(P<0.05),肝损害出现时间早(P<0.01),恢复时间长(P<0.01)。结论:2HRZS(E)/4HR方案抗结核治疗对HBVM阳性军人肝功能有明显影响,部队医院使2HRZS(E)/4HR方案治疗HBVM阳性军人肺结核,应加强护肝和肝功能的检测,并制定有效的肝损害后治疗方案。     

23例恙虫病暴发调查与分析

20 0 0年 8月 2 1～ 31日 ,驻湘武警某部发生一批以起病急骤、持续高热、局部淋巴结肿大、焦痂及皮疹为典型表现的病人。经流行病学调查 ,结合临床各项检查 ,证实为一起恙虫病暴发。1　发病情况　 　首例病人发病于 8月 2 1日 ,2 6日发病达高峰 ,发病数增至 17例 ,8月 31日发病停止 ,历时 11ｄ。先后共发病 2 3例 ,罹患率 7.19%。患者均为男性 ,平均年龄 (2 0 .7± 2 .3)岁 ,其中战士 2 1名 ,干部 2名。病例集中分布在该部队的 4个连队 ,罹患率分别为甲连 3.8%、乙连 6 .3%、丙连 16 .3%、丁连 2 .5 %。临床症状主要为高热 (2 3例 )、局部淋…