CD4+、CD8+、CD25+、CD69+淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体及同期假孕小鼠淋巴结中的差异

目的：研究种间胚胎植入期母体淋巴结中表达CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋、CD69＋T细胞的百分比变化,并探讨这种变化对种间胚胎植入的影响。方法：利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术,检测种间、同种胚胎移植以及同时期假孕母体淋巴结中表达CD4^＋、CD8^＋、CD25^＋、CD69＋的T淋巴细胞对应CD3^＋细胞的百分率。结果：与同种胚胎移植后的植入相比,种间胚胎移植后植入期母体淋巴结中,CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD25^＋淋巴细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例均极显著低于同种胚胎移植的植入期受体（P〈0.01）;而CD3^＋CD8^＋淋巴细胞占CD3^＋淋巴细胞的比例显著低于同种胚胎移植的植入期受体（P〈0.05）;CD3^＋CD69＋淋巴细胞在种间、同种胚胎植入期母体淋巴结中的比例却无显著差异（P〉0.05）。种间胚胎植入时母体淋巴结中CD4^＋/CD8^＋的比例,与同种胚胎植入受体和假孕小鼠相比,三者之间均无统计学意义上的显著差异（P〉0.05）。结论：种间胚胎移植后从植入期开始,母体淋巴结中的淋巴细胞就发生了不利于胚胎植入的全身免疫反应。     

实时定量PCR评价小鼠胸腺功能方法的建立

目的建立实时定量PCR检测小鼠胸腺及脾脏T淋巴细胞中信号结合T细胞受体删除环（sjTRECs）水平的方法。推测其中的初始T细胞的数目,评价胸腺功能,从而为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。方法提取小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞基因组DNA,PCR扩增目的片段。纯化构建标准质粒的RAG2片段,构建标准重组质粒并鉴定。优化PCR体系后,实时定量PCR反应建立标准曲线,并检测不同品系（BALB／c和C57BL／6）成年小鼠胸腺及脾脏淋巴细胞sjTRECs含量。结果成功构建标准质粒。确定最适实时定量PCR反应条件后,在实时定量PCR中建立可信度高的标准曲线。建立的方法分析表明,这两个不同品系的sjTRECs含量统计学差异不显著。结论成功建立定量检测小鼠T淋巴细胞中sjTRECs含量从而推测其中的初始T细胞数目的方法。为胸腺功能研究及胸腺研究模型的建立提供研究依据和方法。     

喜树碱诱导Jurkat细胞线粒体膜电势和线粒体质量变化的研究

目的： 研究喜树碱（camptothecin，CPT）诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体膜电势和线粒体质量的变化。 方法： 用喜树碱处理Jurkat细胞，利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术研究细胞早期凋亡, PI染色流式细胞术测细胞周期, Annexin V-PE/DiOC6(3) 双染流式细胞术检测线粒体膜电势（△ψm），NAO染色流式细胞术检测线粒体质量。 结果： 在10 μmol·L-1 CPT诱导下，6 h 时Jurkat 细胞早期凋亡的细胞比率（22.59±1.04）%显著高于对照组（3.93±0.73）%（P<0.01）。CPT组坏死比率（2.48±0.53）%与对照组（2.78±0.63）%无显著差异（P>0.05）；并可使细胞出现明显的凋亡峰。晚期凋亡的细胞比率为（13.58±0.97）%显著高于对照组（3.18±0.51）%（P<0.01），CPT组G0/G1期细胞比率（48.14±0.96）% ，明显高于对照组（44.09±0.43）%（P<0.01）。CPT组线粒体发生明显去极化现象，AnnexinV+DiOC6(3)-的细胞比率为（19.47±0.69）%，而对照组比率为（4.21±0.40）%，差异显著（P<0.01）。同时，CPT组线粒体质量显著低于对照组：CPT组NAO+细胞比率为（74.77±1.66）%，对照组为（92.24±1.41）%（P<0.01）。 结论： CPT诱导Jurkat细胞凋亡过程中线粒体去极化作用增强并且线粒体质量下降，表明该凋亡过程与线粒体途径密切相关。     

MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。