基于VEGF/PI3K/Akt/eNOS信号通路探讨木犀草素干预A型流感病毒的作用机制

目的 探讨木犀草素对A型流感病毒（influenza A virus, IAV）感染的小鼠肺上皮细胞损伤模型的作用机制。方法 将小鼠肺上皮MLE-12细胞分为正常组、模型组、奥司他韦组、高剂量组和低剂量组,除正常组外,其余4组均使用IAV感染,正常组加入等量病毒稀释液;2 h后弃病毒工作液,正常组和模型组加入病毒维持液,药物组加入用病毒维持液稀释的药物工作液,干预8 h后收集细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;ELISA实验检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达;免疫荧光检测细胞内血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）蛋白表达情况;RT-qPCR技术检测细胞内VEGF、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)、3-磷酸肌醇激酶（phosphoinositide 3-kinase, PI3K）和内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNO...     

麻杏石甘汤通过外泌体miR-1249-5p靶向SLC4A1抑制流感病毒细胞级联损伤效应研究

目的 探究麻杏石甘汤通过外泌体miR-1249-5p靶向溶质载体家族4成员A1(solute carrier family 4 member 1,SLC4A1)抑制流感病毒诱导的肺上皮细胞损伤-巨噬细胞极化的级联损伤效应的作用机制。方法 以肺上皮细胞为研究对象,采用CCK-8检测麻杏石甘汤含药血清的安全剂量和对流感病毒刺激肺上皮细胞治疗剂量,NanoSight鉴定肺上皮细胞源外泌体的粒径和浓度,qRT-PCR检测外泌体中miR-1249-5p基因表达。以与肺上皮细胞源外泌体共培养的巨噬细胞为研究对象,采用qRT-PCR检测巨噬细胞中miR-1249-5p、SLC4A1和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通路相关基因表达;Western blotting检测巨噬细胞中SLC4A1和NF-κB通路相关蛋白表达;流式细胞术和qRT-PCR检测巨噬细胞M1/M2极化表型。结果 CCK-8结果显示,10%和20%的麻杏石甘汤含药血清对肺上皮细胞无细胞毒性,显著抑制流感病毒诱导的肺上皮细胞损伤(P<0.05、0.01);NanoSight检测各组肺上皮细胞源外泌体...     

基于铁死亡途径探讨龟鹿二仙胶治疗少弱精子症的作用及机制

目的 通过网络药理学和体内外实验研究，探讨铁死亡在龟鹿二仙胶治疗少弱精子症中的作用。方法 通过TCMSP数据库、HERB数据库、PubChem数据库和Swiss数据库获取龟鹿二仙胶的活性成分和作用靶点，Genecard数据库和FerrDb数据库检索铁死亡基因，GEO数据库获取少弱精子症差异基因，三者取交集构建蛋白互作网络，进行基因本体（gene ontology,GO）功能和京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。使用H2O2刺激小鼠睾丸支持细胞构建氧化应激损伤模型，并用龟鹿二仙胶含药血清干预损伤模型细胞，观察细胞形态，检测细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、总铁和亚铁离子含量，透射电镜观察细胞超微结构，qRT-PCR和Western blotting检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synt...     

Toll样受体4在A型流感病毒诱导的小鼠肺部炎症中的作用机制

目的：通过研究A型流感病毒（influenza A virus, IAV）诱导的野生型（wild-type, WT）和Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)敲除型（TLR4del）C57BL/6小鼠肺部炎症差异，探讨TLR4在IAV诱导的肺部炎症中的作用机制。方法：设立WT组和TLR4del组，用IAV滴鼻感染WT小鼠和TLR4del小鼠以构建小鼠肺炎模型，每组各48只。分别在感染0、1、3、5、7和9 d处理动物。常规法检测小鼠体质量，计算肺指数、脾指数和胸腺指数。使用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin, HE）染色法检测不同时间点各组小鼠肺组织病理变化。ELISA实验检测小鼠支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-6和IL-8的含量，探讨不同时间点各组小鼠炎症因子的分泌情况。RT-qPCR、免疫组化和Western blot检测肺组织中TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation ...