带标签的高迁移率蛋白N2(HMGN2)重组质粒用于亚细胞定位分析

为进行HMGN2的亚细胞定位分析,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HMGN2cDNA,以pcDNA3.1-myc-his和pEGFP-N1为载体,成功构建出HMGN2真核表达载体,转染HeLa细胞,转染效率达70%~80%,用抗六组氨酸臂的单克隆抗体经免疫细胞化学染色显示经pcDNA3.1-myc-his-HMGN2转染的HeLa细胞除细胞核外,胞浆亦明显着色,未转染的Hela细胞无论细胞核还是细胞浆均显阴性;用兔抗人HMGN2多克隆抗体进行的免疫细胞化学染色显示转染的HeLa细胞与用抗六组氨酸臂的单克隆抗体检测结果相同,而未转染的Hela细胞核内和胞浆也均有着色。用两种抗体行ELISA分析在细胞培养上清亦检测到HMGN2。激光共聚焦显微镜下观察pEGFP-N1-HMGN2转染的HeLa细胞发现绿色荧光主要在核内,但核外也同样存在。本实验结果证明HMGN2不仅存在于细胞核中,而且分布于细胞浆,亦可分泌到细胞外。     

卡介苗增强人肺腺上皮细胞β—防御素-1基因的转录

目的 :研究嗜麦芽窄食单胞菌拓谱异构酶II和IV的突变与氟喹诺酮类药物的耐药关系 ,为新药开发提供实验依据。方法 :选择对环丙沙星MIC >2mg/L且主动外排机制阴性的菌株 ,对其gyrA和 parE的喹诺酮决定区域基因分别进行PCR扩增 ,纯化后直接测序。结果 :嗜麦芽窄食单胞菌在DNA解旋酶最常见的 83位和 87位没有突变 ,同时在GyrA的整个QRDRs没有氨基酸的改变 ,并且其 83位是Gln而不是其它革兰阴性菌常见的Ser或Thr。 5株菌中的parE各有 1株菌在 4 0 2和 4 32突变 ,但是该突变与FQNS耐药不相关 ,未观察到Valdezate研究中的 1 /2菌株的…