半巢式PCR技术检测牙菌斑唾液及胃黏膜中幽门螺杆菌

本文通过半巢式PCR对 82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃黏膜中的幽门螺杆菌 (Hp)进行了检测。 82例患者中活动期十二指肠溃疡患者 2 4例 ,慢性浅表性胃炎 2 7例 ,慢性萎缩性胃炎 31例 ,其中男性 4 2例 ,女性 4 0例 ,平均年龄 4 2 .3岁。半巢式PCR首先以 1对引物扩增出磷酸葡萄糖胺变位酶基因 (phosphogluco saminemu tasegene ,glmM) 75 6bp的片段作为模板 ,再以半巢式引物扩增出 4 96bp的最终产物。引物 0 :5′ CGCGAGCCACAACCCTTTTGAAG 3′ ;引物 1:5′ CGCGCTCACTTGCAAAGCGCACAC 3′;引物 2 :5′…     

应用混合纯化重组亚单位抗原诊断幽门螺杆菌感染

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染的血清学检测因经济简便而倍受重视,所用抗原的特异性是该方法诊断符合率高低的关键。我们采用基因工程技术克隆了Hp热休克蛋白A亚单位(HspA)和尿素酶B亚单位(UreB)的基因,并将其在基因工程菌中成功表达,在此基础上对重组蛋白rHspA和rUreB进行了纯化。之后,我们取纯化的rHspA、rUreB和二者的混合物以及实验室制备的其他2种抗原,用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行HP抗体的对比检测。     

重组幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的高效表达及其初步纯化

目的 在大肠杆菌中高效表达幽门螺直菌的热休克蛋白A基因（hspA)，并对其初步纯化。方法 用巢式PCR扩增hspA基因。经测序证实后，克隆于表达载体pIM-1中，转化大肠杆菌。以SDS－PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达，并测定N－端氨基酸的序列。采用固相镍离子亲和层析，对重组hspA进行初步纯化。结果 扩增的hspA基因为357bp，并在大肠杆菌中得到高效可溶性表达。重组蛋白的表达量最高可达细菌总蛋白的60．5％。免疫印迹及氨基酸测序结果证实，表达产物为幽门螺杆菌hspA亚单位。固相镍离子亲和层析初步纯化的重组HspA的纯度为87．8％，结论 hspA亚单位的高效表达与初步纯化，为批量获得Hp亚单位抗原打下了基础。     

电磁辐射对电子对抗部队官兵血细胞及尿液成分的影响

目的探讨高强度电磁辐射对电子对抗官兵血细胞和尿液分析指标的影响。方法随机选取某电子对抗部队不同作业人员151人作为调查对象,根据工作岗位不同划分为电磁辐射组62例和对照组89例。通过问卷调查研究对象的年龄、疾病史、吸烟情况,采集晨尿和静脉空腹血,使用尿液分析仪和全自动血液分析仪进行尿液和血细胞检查。结果电磁辐射组的尿液微量白蛋白(m ALB)阳性率、平均血小板体积(MPV)异常率、淋巴细胞百分数、MPV计数和大血小板比率高于对照组,单核细胞数量、中性粒细胞数量、中性粒细胞百分比、血小板压积、血小板计数、白细胞计数低于对照组(P0.05,P0.01)。结论电磁辐射可能影响电子对抗部队官兵的肾功能和外周血细胞数量及组成。     

尿素对幽门螺杆菌生长的影响研究

目的 :研究尿素对幽门螺杆菌生长的影响。方法 :在幽门螺杆菌培养基中分别加入 3种浓度 (5 mmol/ L,10 mmol/ L和 2 0 m mol/ L )的尿素 ,然后将培养基 p H分别调至 3.5、4 .5、5 .5。将 10株 Hp分别接种于这 9种培养基中 ,以确定最佳条件组合。之后采用最佳条件进行胃黏膜活检标本 Hp的培养。结果 :10株 Hp在 9种含尿素培养基中以尿素浓度为 10 mmol/ L、p H为 4 .5时生长最好 ,其他 8种与之比较差异极为显著 (P<0 .0 1) ,5 7份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为 10 mm ol/ L、p H为 4 .5时生长最好 ,其他 8种与之比较差异极为显著 (P<0 .0 1) ,5 7份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为 10 mmol/、p H 4 .5培养基和 p H 7.0不含尿素的普通 Hp培养基中 ,32份标本 (5 6 .1% )在尿素培养基中培养阳性 ,其中 2 2份 (38.6 % )在普通培养基中培养阳性。结论 :含有适当浓度尿素的培养基可用于胃黏膜 Hp的分离培养。     

半巢式PCR技术在幽门螺杆菌检测中的应用

目的采用半巢式PCR方法检测牙菌斑、唾液及胃粘膜幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp),以了解口腔中Hp与胃粘膜Hp感染的关系.方法利用半巢式PCR方法(Heminested PCR Assay)扩增磷酸葡萄糖胺变位酶基因(phosphogluco-samlne mutase gene、glmM)内部片段,并对82例慢性胃炎和十二指肠溃疡患者的牙菌斑、唾液及胃粘膜进行检测.结果56例确诊Hp感染的患者中胃粘膜半巢式PCR检测全部阳性,22例(39.3%)牙菌斑Hp阳性,34例(60.7%)唾液Hp阳性;26例胃粘膜Hp阴性的患者中3例(11.5%)牙菌斑Hp阳性,3例(11.5%)唾液Hp阳性.结论Hp不仅存在于胃粘膜组织中,也存在于口腔牙周组织,提示口腔中的Hp可能与胃粘膜中的Hp存在着一定的病因学关系.     

尿素对幽门螺杆菌生长的影响研究

目的:研究尿素对幽门螺杆菌生长的影响.方法:在幽门螺杆菌培养基中分别加入3种浓度(5 mmol/L,10 mmol/L和20 mmol/L)的尿素,然后将培养基pH分别调至3.5、4.5、5.5.将10株Hp分别接种于这9种培养基中,以确定最佳条件组合.之后采用最佳条件进行胃黏膜活检标本Hp的培养.结果:10株Hp在9种含尿素培养基中以尿素浓度为10 mmol/L、pH为4.5时生长最好,其他8种与之比较差异极为显著(P＜0.01),57份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为10 mmol/L、pH为4.5时生长最好,其他8种与之比较差异极为显著(P＜0.01),57份胃镜活检标本分别接种于尿素浓度为10 mmol/、pH 4.5培养基和pH 7.0不含尿素的普通Hp培养基中,32份标本(56.1 %)在尿素培养基中培养阳性,其中22份(38.6%)在普通培养基中培养阳性.结论:含有适当浓度尿素的培养基可用于胃黏膜Hp的分离培养.     

新型含人血幽门螺杆菌培养基的研制

目的:探讨采用人血替代羊血用于幽门螺杆菌培养的可能性.方法:将幽门螺杆菌分别接种于含7 %羊血或人血的培养基,培养5 d后进行菌落计数.结果:幽门螺杆菌在含人血培养基生长情况与在含羊血培养基培养结果基本一致(P＞0.05).人血中抗Hp-IgG阳性对幽门螺杆菌生长无明显影响,但未经补体灭活人血明显抑制幽门螺杆菌的生长(P＜0.01),人血对幽门螺杆菌的杀伤活性与补体介导作用有关.结论:人血可替代羊血用于幽门螺杆菌的培养.     

半巢式PCR检测胃黏膜幽门螺杆菌与其它四种方法的比较

目的:建立一种半巢式PCR方法检测幽门螺杆菌(helicobacterpylori,HP)感染。方法:利用半巢式PCR方法(heminestedPCRassay)扩增磷酸葡萄糖胺变位酶基因(phosphogluco-saminemutasegene)内部片段,从而特异性地检测临床消化道标本中低拷贝数的幽门螺杆菌。并对其特异性和敏感性进行了分析,同时与临床常用的快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验和细菌培养4种方法进行了比较。结果:半巢式PCR方法敏感性和特异性分别为98.2%and96.0%,采用半巢式PCR方法、快速尿素酶试验、涂片镜检、14C尿素呼气试验、细菌培养检测HP的阳性率分别为69.5%,61.0%,53.7%,67.1%,48.8%。结论:半巢式PCR是一种简便、高敏感性和特异性检测HP的方法。     

重叠癌合并慢性粒细胞白血病

1　病例资料女,4 2岁。因右侧乳腺包块,经X线透光检查和针吸活检证实为右侧乳腺浸润性导管癌,在我院普通外科行乳腺癌根治术。术后在当地医院行Co6 0 γ放疗,范围包括内乳、锁骨和腋顶,剂量DT 5 0Gy/2 5～30次为一疗程;遂后予环磷酰胺、多柔比星(阿霉素)、5 氟尿嘧啶化疗2个疗程。2年3个月后,发现左下肢腓骨外侧有一2cm×3cm肿物,无红肿及压痛。经病理检查证实为横纹肌肉瘤,在北京肿瘤医院行肿瘤切除术,术后行Co6 0 γ照射切沿外5cm处,放疗1个疗程,剂量DT 6 0Gy/30次/6周。1年3个月后,患者出现乏力、多汗、低热、骨痛,来我院就诊。B…