抗α-玉米赤霉醇单克隆抗体的研制及初步应用

目的:制备抗α-玉米赤霉醇(α-ZER)的单克隆抗体(mAb),建立对动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的检测方法。方法:结合O-羧甲基羟胺法和EDC法制备α-ZER-BSA偶联物,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb。用夹心ELISA测定mAbIg亚类;按Beatty法计算亲和常数;间接ELISA法测定效价;用直接竞争ELISA检测mAb与α-ZER的同系物、己烯雌酚、19-去甲睾酮、链霉素及氯霉素等的交叉反应;绘制α-ZER标准品竞争抑制曲线,检定抗体的灵敏度。用该抗体建立的直接竞争ELISA对37份动物肝组织样品进行检测,并与HPLC检测结果比较。结果:紫外线扫描证明,α-ZER-BSA偶联成功。实验获得8株可稳定分泌抗α-ZERmAb杂交瘤细胞株,其中1株(4E5)分泌的mAb效价较高,为5.142×107,其Ig亚型为IgG1。该mAb能特异识别α-ZER及其同系物,而与其它常用兽药无交叉反应。建立了α-ZER直接竞争ELISA,从HPLC确认为阴性的37份样品中,筛出8份阳性样品。结论:利用mAb建立的直接竞争ELISA检测方法,适合动物源性食品中残留α-ZER及其同系物的快速筛选。     

快速检测动物组织中玉米赤霉醇残留的方法

[目的]探索快速检测动物肝组织中玉米赤霉醇残留方法的最佳条件。[方法]首先对肝组织样品采用C18柱和免疫亲和柱的前处理方法，提取玉米赤霉醇；然后，采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测。[结果]二种样品前处理方法的比较，免疫亲和柱提取法较好、提取效率高、可用多次、方法应用稳定；竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)操作简单、方法可靠，适宜规模化检测。[结论]本研究认为，采用免疫亲和柱的前处理方法和ELISA的结合，能有效地发现动物肝组织中痕量玉米赤霉醇残留。     

常见食源性致病菌基因芯片鉴定技术

目的：建立鉴定食源性致病菌的基因芯片技术。方法：采用复合PCR方法扩增致病菌特异性DNA片段，结合基因芯片杂交技术鉴定不同的食源性致病菌。结果：本研究完成了采用3对引物的复合PCR扩增；不同致病菌特异性核苷酸片段同时布阵在一张芯片上；标记物质采用了非放射性的生物素，经不同标准菌种、实际检验样品和水平测试样品的考核验证，该鉴定系统灵敏度达620cfu／g，特异性高，基因芯片质量稳定，该鉴定系统基本含盖了目前食源性致病菌鉴定的需要。结论：常见食源性致病菌基因芯片鉴定技术，可为常规细菌检验方法的最终鉴定提供进一步佐证，尤其在一些培养条件苛刻的致病菌（产单核李斯特菌、弯曲菌等）的鉴定，以及在VITEK仪无法鉴定和手工鉴定判断误差大的情况下，基因芯片方法将发挥其独特的技术性优势，大大提高检验鉴定结果的准确性。