凝血酶促进结肠癌SW480细胞生长的研究

目的探讨凝血酶对结肠癌SW480细胞增殖及细胞周期的影响。方法将20 nmol/L、100 nmol/L、500nmol/L的凝血酶作用于SW480细胞48 h,以未处理组（0 nmol/L）作为对照。CCK-8（cell counting kit-8）法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期变化;RT-PCR检测蛋白酶活化受体-4（protease-activated receptor-4,PAR-4）的mRNA表达;Western blotting检测NF-κB p50蛋白表达。结果在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可剂量依赖性的促进SW480细胞的增殖;细胞周期显示G0/G1期细胞百分数减少,S期及G2/M期细胞百分数增加,表明凝血酶可诱导细胞从G0/G1期向G2/M期发展,从而促进细胞增殖;随着凝血酶浓度的增加,PAR-4 mRNA及NF-κB p50蛋白含量也有不同程度的增加。结论在20-500 nmol/L浓度范围内,凝血酶可促进结肠癌SW480细胞的增殖,加速细胞周期进程;其作用可经PAR-4介导,并与NF-κB信号通路活化有关。     

2型糖尿病载脂蛋白ApoA1、ApoB100检测的临床研究

目的:探讨人血清血脂和载脂蛋白ApoA1、ApoB100的水平及ApoA1/ApoB100比值在2型糖尿病并发心血管疾病的意义。方法:选取2型糖尿病患者55例,根据有无并发症分为4组(无并发症组,1种并发症组,2种并发症组,3种并发症组)。同期选取健康人47例对照组。全自动生化分析仪测定各组血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoA1、ApoB100水平,并计算ApoA1/ApoB100比值。结果:2型糖尿病组与对照组相比TG、TC、LDL-C、ApoB100水平明显升高(P<0.01),HDL-C、ApoA1/ApoB100比值明显下降(P<0.05),ApoA1水平无明显下降(P>0.05)。2型糖尿病并发心血管病变各组与无并发症组相比,TG、TC、HDL-C、ApoA1水平改变不明显(P>0.05),LDL-C和ApoB100水平明显升高,ApoA1/ApoB100比值显著降低(P<0.05)。结论:定期检查ApoB100和ApoA1/ApoB100,为糖尿病患者预测是否并发心血管病变风险有重要意义。     

焦磷酸测序技术及其应用进展

DNA序列分析技术是现代生命科学研究的核心技术之一,而双脱氧核苷酸链终止法(Sanger法)是目前使用最普遍的DNA序列分析技术。在基于Sanger法的全自动DNA测序技术中,测序反应产生的DNA片段是荧光标记的,这些片段经过平板胶电泳或毛细管电泳得到分离,荧光分子被激发而发光,发出的光信号被检测系统检测。Sanger法的优势在了可以分析未知DNA的序列,且单向反应的读序能力较长,目前的技术可以达到1000bp以上。在实际工作中,很多情况需要对已知序列的DNA片段进行序列验证,而这种分析往往测几十bP就可以满足需要。在这种情况下,Sanger法未…     

人B细胞激活因子受体-TACI基因表达水平的定量测定

目的：建立实时荧光定量PCR（RFQ-PCR）检测人B细胞激活因子受体TACI mRNA含量的方法，初步探讨健康献血员外周血单个核细胞（PBMC）中TACI mRNA表达水平。方法：在TACI基因高保守区设计特异性的引物和荧光探针，PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度，根据标准品建立的标准曲线，由软件自动计算出待测样本中TACI mRNA准确含量，并以TACI mRNA和β2M mRNA含量的比值作为评价TACI表达水平的指标。结果：本法检测TACI mRNA含量的线性范围为10^9-10^1pg／ml，批内和批间重复性测定的CV分别为2．97％-9．32％和5．86％10．29％。40例健康献血员样本的PBMC中35例（87．5％）检出有TACI mRNA表达，范围为0．02-2．11。结论：成功建立RFQ-PCR检测TACI mRNA含量的方法，具有较好的检测灵敏度和重复性，为进一步探讨TACI mRNA表达水平与自身免疫性疾病发病机制之间的关系奠定了基础。     

焦磷酸测序技术及其应用进展

焦磷酸测序技术是一种新的依靠生物发光进行DNA序列分析的技术。在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP聚合与一次荧光信号释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到实时测定DNA序列的目的。此技术不需要荧光标记的引物或核酸探针,也无需进行电泳,具有分析结果快速、准确、灵敏度高和自动化的特点。在遗传多态性分析、重要微生物的鉴定与分型研究、克隆检测和等位基因频率分析等方面具有广泛的应用。     

商品定量试剂盒分析性能的验证试验

目的 验证部分商品定量试剂盒的主要分析性能。 方法 〗根据我国卫生部“医疗机构临床实验室管理办法”和NCCLS指南文件EP6-A的要求,对部分商品定量试剂盒进行精密度、正确度和可报告范围的验证试验。 结果 各商品定量试剂盒的批内、批间精密度CV值分别为0.51%～3.20%、0.61%～4.80%,均小于厂家CV值;正确度试验结果的平均偏倚值（0.40%～5.36%）均低于厂家偏倚值及CLIA′88规定的允许误差的1/2;各项目的可报告范围试验测定值结果与预测值接近,相关系数r＞0.975,线性理想（斜率b接近1）。 结论 本研究验证的商品定量试剂盒的精密度、正确度和可报告范围3方面均达到了临床应用的实验要求。     

NCCLS文件中方法对比及偏差评估(EP9-A)的应用

NCCLS的标准化文件之一——EP9-A：用患者样本的方法比较和偏差的估计，为临床实验室评价一个实验室及生产厂家提供了对评价测定同一被测物的两种方法、试剂或仪器之间偏倚的实验设计，为减少检测结果的误差、保证检测结果的准确可靠，以实现结果之间的可比性提供实验依据，是临床工作者采用患者标本进行不同检测系统比较的标准化途径。     

应用NCCLS EP9-A文件评价两种磷试剂

目的探讨在生化分析仪上使用国产试剂替代进口原装试剂检测血清磷(Phosphor)的可行性。方法按照EP9-A文件提供的方法,每天取临床标本8份,分别用两种试剂测定样本磷,共测定5天,记录检测结果,并对两种试剂进行偏差评估。结果采用两种试剂测定的血清磷结果的相关系数为0.996,截距a=0.019,斜率b=0.999,无方法内、间的离群点,测定结果的偏差在允许误差范围内。结论经过方法对比及偏差评估确定在本实验室使用国产试剂替代进口原装试剂是可行的。     

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞刺激因子的水平研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清B淋巴细胞刺激因子(BLyS)蛋白水平,并探讨其与尿蛋白的关系.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测尿蛋白阳性组(17例)和尿蛋白阴性SLE患者组(20例)血清Blys水平,以健康志愿者(30例)作为对照.结果 SLE患者血清Blys水平明显高于健康对照组(P＜0.05),但尿蛋白阳性组血清Blys水平与尿蛋白阴性组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLE患者Blys水平升高,提示BLyS可能与SLE的发病有关.     

腹腔液CK7 mRNA、CyclinE mRNA及血CA125的测定对卵巢上皮癌诊断价值的比较

术前明确卵巢肿瘤的性质对于处理方式和手术方法的选择至关重要,如以卵巢肿瘤的大小为是否手术的标准,则有一部分卵巢癌患者就被延误治疗,而对卵巢肿瘤的所有患者均手术,又会导致把一部分生理性卵巢肿瘤患者进行不必要的手术而增加患者的痛苦及负担,为了避免上述的不良后果,我们应用RT-PCR法检测卵巢肿瘤腹腔液中的CK7mRNA、CvclinE mRNA表达及放射免疫法测定血CA125水平,并与术后的病理结果相比较,旨在探讨三者单独及联合应用在卵巢肿瘤的定性诊断及早期诊断的价值.