苯乙双胍通过影响线粒体功能促进A549/DDP细胞凋亡

目的 探究苯乙双胍抑制 A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡的可能机制。方法 MTS法检测顺铂（顺铂 组）和苯乙双胍（苯乙双胍组）对 A549/DDP 细胞和 A549 细胞的细胞活力（24 h 和 48 h）的影响。苯乙双胍组以 2.5 mmol/L苯乙双胍处理,对照组采用PBS处理,MTS法检测苯乙双胍对A549/DDP细胞增殖的影响,克隆形成实验检测 苯乙双胍对 A549/DDP细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测苯乙双胍对 A549/DDP细胞凋亡和活性氧（ROS） 胞内线粒体质量（Mitotracker）、钙离子（Rhod-2）的影响,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）变化,三磷酸腺 苷（ATP）试剂盒检测 ATP的变化,Western blot检测苯乙双胍对线粒体氧化磷酸化复合物表达的影响。结果 与顺 铂组比较,苯乙双胍组A549/DDP细胞在24 h和48 h的细胞活力降低（P＜0.05）,而2组间A549细胞24 h和48 h活力 差异无统计学意义。顺铂处理48 h时A549/DDP细胞活力均高于A549细胞（P＜0.05）,而24 h间差异无统计学意义; 苯乙双胍处理的A549/DDP细胞活力低于A549细胞（P＜0.05）。与PBS组相比,苯乙双胍组A549/DDP细胞的24 h和 48 h 增殖率、集落形成数减低,而凋亡率升高,ROS 水平增高,Mitotracker、Rhod-2、mtDNA 及 ATP 水平降低（P＜ 0.05）,线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ中的NDUFB8蛋白、复合物Ⅱ中的SDHB蛋白和复合物Ⅳ中的MTCO1蛋白表达明 显降低（P＜0.05）。结论 （1）A549/DDP细胞较 A549细胞对苯乙双胍更为敏感,但对顺铂耐受性较 A549细胞强。 （2）苯乙双胍通过增加细胞内 ROS、减少线粒体质量、钙离子和 mtDNA、抑制线粒体氧化磷酸化复合物表达,减少 ATP生成,从而抑制A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡。     

慢性乙型肝炎患者血清IL-17表达水平及其调控IL-6/STAT3信号通路的研究

目的探究白介素-17(IL-17)在慢性乙型肝炎(CHB)患者中的表达水平及其与IL-6/STAT3信号通路的关系。方法收集50例CHB患者和50例健康体检者的血清并回顾性收集相关临床特征以及病毒学特征信息,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清中IL-17水平;采用Spearman相关分析方法分析IL-17与CHB患者HBV-DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间的相关性;进一步用人源重组IL-17(rh IL-17)处理HBV复制细胞系Hep G2.2.15后,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)方法检测细胞中IL-6 m RNA水平,通过ELISA方法检测细胞上清IL-6含量,同时采用蛋白免疫印迹法检测STAT3以及磷酸化STAT3(p STAT3)的表达水平。结果与健康对照组相比,IL-17在CHB患者中明显升高,同时IL-17含量与HBV-DNA、ALT及AST之间呈显著正相关性;当rh IL-17作用于Hep G2.2.15细胞时,可以检测到IL-6表达水平以及细胞中p STAT3明显升高。结论 IL-17在CHB患者中明显升高,与HBV-DNA病毒载量之间呈正相关性,并参与、激活IL-6/STAT3信号通路,与HBV复制及CHB疾病的进展密切相关。     

热休克蛋白90(HSP90)对HBV复制的影响

目的探究热休克蛋白90(HSP90)对乙型肝炎病毒(HBV)复制以及HBV稳定复制细胞系细胞增殖的影响。方法在HBV稳定复制细胞系中瞬时转染HSP90过表达质粒与对照质粒,采用Western blot方法验证HSP90过表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HSP90过表达对HBV总RNA,3.5 kb mRNA表达的影响;同时在HBV稳定复制细胞系中稳转HSP90过表达质粒,构建成功后,检测细胞增殖能力的改变。结果 HSP90在HBV稳定复制细胞系Hep AD38和Hep G2.2.15细胞中过表达成功;在过表达HSP90的HepAD38和HepG2.2.15细胞中HBV总RNA,3.5 kb mRNA表达水平均上调;增殖实验显示HSP90可促进HBV稳定复制细胞的增殖。结论HSP90参与HBV的复制,并促进HBV稳定复制细胞系的增殖。     

HCST作为1型糖尿病潜在分子标志物的筛选和机制探究北大核心CSCD

目的：筛选1型糖尿病（T1DM）的潜在分子标志物并分析HCST参与T1DM的可能机制。方法：从GEO数据库下载T1DM和健康人群的单个核细胞微阵列表达数据，借助GEO2R分析差异基因，同时使用R语言进行火山图和热图的可视化。利用String在线工具对差异基因进行PPI分析，MCODE插件筛选关键子网络，DAVID在线分析工具对子网络基因进行GO和KEGG富集分析；CytoHubba插件对PPI网络进行关键基因筛选。结果：T1DM组与对照组相比共得到71个差异基因，其中包含上调基因22个，下调基因49个；利用MCODE插件从PPI网络中筛选1个关键子网络，得分7.5，共有9个节点和30个互作。子网络的9个基因的GO和KEGG富集分析发现，这9个基因主要参与调节免疫反应、细胞的防御反应、免疫应答及细胞溶解的生物过程，且涉及的主要信号通路是自然杀伤细胞介导的细胞毒作用的信号通路；四种算法得到的关键基因通过Venn分析最终筛选出1个关键基因——HCST。HCST在T1DM组明显低于健康对照组，差异有统计学意义。HCST的ROC曲线分析结果显示曲线下面积为0.983 3,P=0.000 1，差异有统计学意义。结论：HCST可成为诊断T1DM的潜在分子标志物和治疗T1DM的潜在靶点。