人抗HBsAg单链抗体-Tat融合基因的构建、表达及表达产物的活性鉴定

目的: 构建人抗HBsAg单链抗体-Tat蛋白转导结构域(ScFv-Tat)融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并分析ScFv-Tat融合蛋白的活性及内化情况. 方法: 设计引物扩增人抗HBsAg单链抗体基因,克隆入含有蛋白转导结构域Tat序列的原核表达载体pTAT-HA,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达. 表达产物用SDS-PAGE及Western blot鉴定,用亲和层析柱纯化. 间接ELISA和ELISA竞争抑制实验分析ScFv-Tat融合蛋白的亲和活性,将纯化蛋白与HBsAg阳性或阴性肝癌细胞共孵育后,免疫细胞化学染色分析ScFv-Tat融合蛋白的结合及内化情况. 结果: 成功地构建了人抗HBsAg单链抗体-Tat融合蛋白的原核表达载体,在IPTG诱导下获得了表达,表达的ScFv-Tat融合蛋白具有与HBsAg结合的活性,并且能够特异性内化入HBsAg阳性肝癌细胞. 结论: 单链抗体与Tat蛋白转导结构域融合后,实现了ScFv-Tat融合蛋白的特异性内化,为该单链抗体的进一步应用奠定了基础.     

重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的构建、表达及其活性鉴定

目的:构建重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6 基因的表达载体,转染SGC7901胃癌细胞后观察其促凋亡作用. 方法:采用重组PCR法,将抗HER2的单链抗体(e23sFv)通过白喉毒素的Furin识别位点的编码序列(FDT)与人重构型caspase-6(RC6)基因重组,构建融合蛋白表达基因e23sFv-FDT-RC6. 将所获得的重组基因克隆入真核表达载体pCMV,以脂质体法瞬时转染HER2阳性的SGC7901细胞和HER2阴性的HeLa细胞. MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况. 间接免疫荧光染色观察目的基因的表达对SGC7901细胞的促凋亡作用. 结果:把e23sFv-RC6,e23sFv-FDT-RC6基因克隆入真核表达载体pCMV,酶切鉴定和基因测序证明目的基因序列正确. 转染SGC7901和HeLa细胞后,Western Blot检测到目的蛋白的表达. MTT实验观察到转染pCMV-e23sFv-FDT-RC6的SGC7901细胞的增殖被明显抑制,间接免疫荧光染色可以观察到表达e23sFv-FDT-RC6融合蛋白的SGC7901细胞形态发生改变,部分细胞呈现典型凋亡特征. 结论:重组抗HER2 ScFv/FDT/caspase-6基因的表达可促进HER2阳性SGC7901胃癌细胞的凋亡.     

随舰长航对任务人员健康状况的影响

目的通过对随舰长航任务人员的健康状况进行流行病学调查,分析相关高危因素,为保障其健康建立系统的预警机制,及提供科学可行的干预措施。方法通过对长航任务人员一般情况、动态心电图、胃肠功能及肺功能的检测和评估,对相关疾病患病率进行分析,筛查出影响任务人员健康状况的高危因素。结果首次航行人员发生晕船比例为95.2%,发生失眠比例为73.5%。长航过程中的睡眠剥夺对任务人员的动态心电活动影响较大。任务人员睡眠时间少,工作强压力大,较少休闲娱乐时间,吸烟等因素与功能性胃肠病的发病有关。长航工作条件对任务人员第一秒用力肺活量等肺功能指标有较明显的影响。结论长航对于首次航行人员睡眠和晕船影响较大。长航环境对执行任务人员的动态心电活动、胃肠功能、肺功能均有较明显的影响。根据长航特点及相关高危因素,尽早采取干预措施,并制订最佳治疗方案,可有效缓解长航对任务人员健康状况的影响。