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目的 体外研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质于细胞(MSCs)的方法.方法 用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体Ad-GFP转染,荧光显微镜检测其转染效率,CCK-8法检测转染细胞的增殖能力.结果 Ad-GFP对大鼠MSCs的感染率高达90.0%,感染1月后仍有稳定表达;转染细胞的增殖能力与未转染细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 重组腺病毒载体Ad-GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖能力不受影响,可作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法. 相似文献
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目的了解大鼠对于人胎盘间充质干细胞是否存在天然免疫耐受,分析人胎盘间充质干细胞在大鼠体内出现免疫排斥的可能。方法分离提取并鉴定人胎盘间充质干细胞,观察大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后有无出现相关的免疫排斥症状、细胞在大鼠体内的分布情况及脏器的病理改变。结果大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后未出现急慢性免疫排斥反应,肝、肾、肺可见标记后的人胎盘间充质干细胞的分布,但相关病理切片未见明显的淋巴细胞浸润和纤维组织增生现象。结论人胎盘间充质干细胞与大鼠脏器间存在天然的免疫耐受。 相似文献
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背景:要获得动物实验需要的标记大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养、扩增和示踪已成为实验的关键环节。目的:采用全骨髓培养分离大鼠骨髓间充质干细胞,以及PKH26对其体外标记,建立一种方便、实用的分离培养并示踪骨髓间充质干细胞的方法。方法:通过全骨髓培养分离法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。经传代扩增,细胞进一步纯化。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞按PKH26标记程序进行标记后培养,荧光显微镜下观察标记后细胞生长状态、萤光强度变化和传代培养效果。利用四唑盐比色法测定标记后骨髓间充质干细胞的生长曲线。结果与结论:全骨髓培养分离法能成功获得纯度高的骨髓间充质干细胞,用PKH26标记后的骨髓间充质干细胞呈红色荧光,体外连续传代培养3代后,细胞荧光强度逐渐减弱。PKH26标记骨髓间充质干细胞的生长形态、生长活力不发生改变。结果证实全骨髓培养分离法简便易行,能获取较高纯度的生长增殖状态良好的骨髓间充质干细胞,PKH26荧光标记大鼠骨髓间充质干细胞是一种有效、实用的方法。 相似文献
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卵巢早衰(premature ovarian failure, POF)是指妇女在40岁以前因某种原因引起的闭经、不育、雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病,在人群中的发病率约为1%~3%.POF危害妇女身心健康,导致生育能力丧失、生殖器官萎缩、围绝经期综合征等,同时还可能引发一系列心理及社会问题[1].POF的发生与遗传、免疫、环境、放疗或化疗等因素密切相关[2],其诊断及治疗引起了国内外临床医生的日益关注.本文就近年来卵巢早衰诊断及治疗方面的研究进展概述如下. 相似文献
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目的探讨携带Bcl-2基因的慢病毒对体外培养的原代人卵巢颗粒细胞感染效率及对细胞凋亡的影响。方法构建携带Bcl-2基因的慢病毒载体,包装成高滴度慢病毒,将重组慢病毒在体外分别以不同感染复数(MOI)值(10、50、100、200、400)感染人卵巢原代颗粒细胞,观察感染24、48、72、96h后的感染效率及细胞增殖情况;将人卵巢颗粒培养24h后,分为3组。实验组:加MOI值为100的重组慢病毒GC-FU-Bcl-2;空白对照组:不加病毒;空载体对照组:加空载病毒GC-FU-EGFP。转染后第3、7天,采用Western blotting及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测目的基因Bcl-2在人卵巢原代颗粒细胞中的蛋白及mRNA的表达水平。同时转染后第3天采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果原代培养的人卵巢颗粒细胞24h即贴壁,集落样生长,呈多角形或梭形;当MOI为100时,细胞的形态和生长不受影响,且感染效率较高,感染后72h达高峰,感染率达60%。携带Bcl-2基因的慢病毒感染靶细胞后,实验组中检测到Bcl-2基因及蛋白的表达,且卵巢颗粒细胞的凋亡率明显低于空载体对照组。结论携带Bcl-2基因的慢病毒感染原代培养的人卵巢颗粒细胞后可过度分泌Bcl-2蛋白,抑制细胞凋亡。 相似文献
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背景:化疗药物可使处于生育年龄女性患者卵巢功能有不同程度的损伤,重则致卵巢早衰,已成为卵巢早衰发病的一个重要原因。因此,改善和恢复患者卵巢功能,已成为一个重要的课题。 目的:探索骨髓间充质干细胞治疗化疗所致卵巢损伤的可行性及疗效。 方法:建立化疗性卵巢衰竭模型,建模后注射PKH26标记后的骨髓间充质干细胞,于移植细胞后第15,30,45,60天,各取5只大鼠经尾静脉取血测卵泡刺激素、雌二醇水平并处死大鼠,留取右侧卵巢行常规病理切片,光学显微镜下记录卵巢卵泡数量变化。细胞移植后30 d,取2只大鼠与雄鼠合笼,观察生殖能力的差异。 结果与结论:18%(4/22只)大鼠移植干细胞后动情周期能逐渐恢复,卵泡刺激素水平有所下降而雌二醇水平上升,卵巢病理切片提示卵泡数量减少,大鼠生育能力未受损害。结果表明骨髓间充质干细胞可以部分改善化疗后大鼠卵巢功能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点:干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接: 相似文献
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背景:要获得动物实验需要的标记大鼠骨髓间充质干细胞,体外培养、扩增和示踪已成为实验的关键环节。
目的:采用全骨髓培养分离大鼠骨髓间充质干细胞,以及PKH26对其体外标记,建立一种方便、实用的分离培养并示踪骨髓间充质干细胞的方法。
方法:通过全骨髓培养分离法纯化大鼠骨髓间充质干细胞。经传代扩增,细胞进一步纯化。取第3代大鼠骨髓间充质干细胞按PKH26标记程序进行标记后培养,荧光显微镜下观察标记后细胞生长状态、萤光强度变化和传代培养效果。利用四唑盐比色法测定标记后骨髓间充质干细胞的生长曲线。
结果与结论:全骨髓培养分离法能成功获得纯度高的骨髓间充质干细胞,用PKH26标记后的骨髓间充质干细胞呈红色荧光,体外连续传代培养3代后,细胞荧光强度逐渐减弱。PKH26标记骨髓间充质干细胞的生长形态、生长活力不发生改变。结果证实全骨髓培养分离法简便易行,能获取较高纯度的生长增殖状态良好的骨髓间充质干细胞,PKH26荧光标记大鼠骨髓间充质干细胞是一种有效、实用的方法。 相似文献
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目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)在内异症中的局部微环境作用。方法:60只雌性大鼠采用皮下移植法内异症造模,术后6h随机分为3组,每组20只。A组:尾静脉注射1×107PKH26标记的BMSCs,用DMEM-F12培养基悬浮成单细胞悬液1ml;B组:尾静脉注射DMEM-F12培养基1ml;C组:尾静脉注射生理盐水1ml。饲养2周和6周时,检测内异症病灶体积,荧光显微镜检测PKH26标记细胞在内异症的迁移情况,免疫组化法检测VEGF、CD34、Bcl-2及Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:移植后2周和6周时,A组内异症病灶均可见PKH26标记的BMSCs散在分布。移植后2周和6周时,3组间的异位病灶体积、微血管密度(MVD)、细胞凋亡率均有显著差异。A组的异位病灶体积和MVD均大于B组和C组,细胞凋亡率均低于B组和C组;3组间VEGF、Bcl-2表达均有显著差异,A组均高表达VEGF和Bcl-2;3组间Bax表达均无统计学差异。结论:BMSCs可经血循环迁移至内异症病灶,调节局部微环境,可能对内异症的发生发展发挥一定作用。 相似文献