粘多糖贮积症Ⅰ型的分子遗传学进展

粘多糖贮积症为糖胺聚糖降解代谢障碍所引起的一组遗传代谢病。根据不同的酶缺陷 ,可分为 7型[1] ,鉴于我国Ⅰ型最常见 ,本文就MPS Ⅰ的临床特征、α L 艾杜糖苷酸酶基因结构、突变类型、特点及检测方法加以综述。     

中国人粘多糖贮积症I型IDUA基因突变的检测

目的：检测中国人粘多糖贮积症I型患IDUA基因（IDUA）突变。方法：采用PCR－SSCP、PCR产物直接测序等技术对35例粘多糖贮积症I型患的IDUA第2、6、7、8、9和10外显子相邻区域进行突变筛查。结果；本研究筛查出7种突变，均为单碱基置换。一内含子区突变nt1486C→T；一中性突变nt945G→C；1种无义突变E404X；4种错义突变：F198L、L218V、A361T和V454I。结论：中国人IDUA在第2、6、7、8、9和10外显 子区存在突变。在上述检测到的7种突变中，A361T国外已确定为多态性，E404X国外已报道为重型突变。而nt1486C→T、F198L和L218V和V454I为我们首次发现和报道，可能为新突变，但其突变性质还有待于进一步鉴定。     

利用体外定点诱变技术构建人突变型α-L-艾杜糖醛酸酶基因

【目的】构建突变型α L 艾杜糖醛酸酶基因 (IDUA)cDNA ,为体外表达、鉴定突变的性质提供物质基础。【方法】以野生型pcDNA3 IDUA为基础质粒 ,采用双引物法体外定点诱变技术 ,引入突变E40 4X。【结果】突变区域经PCR SSCP和测序证实诱导突变成功。【结论】本研究成功构建了突变型IDUAcDNA ,可用于下游的体外表达 ;此定点突变技术具有简便、诱变效率高等优点 ,是体外构建突变型基因的一种有效方法。     

登革病毒在白纹伊蚊细胞内免疫的研究

目的 研究白纹伊蚊对登革病毒产生细胞内免疫现象的分子机制。方法 扩增与克隆登革病毒NGC株的前膜蛋白基因prM，将prM基因以3种不同表达形式重组入昆虫表达载体pBh-spEGFP，以3种重组质粒分别转染白纹伊蚊C6／36细胞，测定转染后的细胞对登革病毒感染的免疫效果。结果 构建了包含prM基因的3种昆虫表达载体，Western blot和荧光显微镜观察证明在C6／36细胞中成功表达了prM-EGFP融合蛋白。MTT实验和空斑形成实验反映了C6／36细胞对登革病毒产生了细胞内免疫。结论 3种重组质粒均可诱导细胞内免疫现象，说明无论是否表达prM蛋白，只要有prM基因转录就可引起细胞内免疫现象；prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫；其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。     

中国人粘多糖贮积症Ⅰ型IDUA基因突变的检测

[目的]检测中国人粘多糖贮积症Ⅰ型患者IDUA基因(IDUA)突变.[方法]采用PCR-SSCP、PCR产物直接测序等技术对35例粘多糖贮积症Ⅰ型患者的IDUA第2、6、7、8、9和10外显子及其相邻区域进行突变筛查.[结果]本研究筛查出7种突变,均为单碱基置换.一内含子区突变nt1486C→T;一中性突变nt1945G→C;1种无义突变E404X;4种错义突变F198L、L218V、A361T和V454I.[结论]中国人IDUA在第2、6、7、8、9和10外显子区存在突变.在上述检测到的7种突变中,A361T国外已确定为多态性,E404X国外已报道为重型突变.而nt1486C→T、F198L和L218V和V454I为我们首次发现和报道,可能为新突变,但其突变性质还有待于进一步鉴定.     

利用体外定点诱变技术构建人突变型α—L—艾杜糖醛酸酶基因

目的：构建突变型α－L－艾杜糖醛酸酶基因（IDUA）cDNA，为体外表达，鉴定突变的性质提供物质基础。方法：以野生型pcDNA3-IDUA为基础质粒，采用双引物法体外定点诱变技术，引入突变E404X。结果：突变区域经PCR－SSCP和测序证实诱导突变成功。结论：本研究成功构建了突变型IDUA cDNA，可用于下游的体外表达，此定点突变技术具有简便，诱变效率高等优点，是体外构建突变型基因的一种有效方法。