电穿孔导入法在外源基因转染家兔精子的作用研究

<正> 目前建立转基因动物最常用的方法仍然是经典的受精卵显微注射法.但这一方法存在诸多的不足之外:所需的仪器设备价格昂贵;技术要求高;成功率低.电穿孔导入法,是通过高压电场使细胞膜通透性发生暂时性的可逆变化,从而使DNA分子进入细胞内的一种物理方法.目前已有一些穿孔导入法促使外源基因转染精子的报道,但由于各处实验室所使用的电击仪器不同,电击缓冲液及电击条件也不相同,因此,各实验结果的报道并不一致.我们用假阴道法采集家兔精子,经电击缓冲液洗涤3次,调整精子浓度至10~6个/ml.电击悬液总体积100ml,加入环状重组质粒pV-WAP-tPA(浓度20μg/ml).使用BAERON600型基因转移仪,设电击条件:周期10;脉冲数1000;脉冲宽度100;距离2.0mm;电压2000,4000,6000;脉冲时间500,1000,1500ms.另设电击悬液中不加质粒作     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。     

中西医结合肿瘤病的病因与临床机理探讨

目的整理、分析、研究、探讨肿瘤病的病因和临床机理,以指导其临床治疗.方法作者在祖传中医秘的基础上,对四十余年大量临床资料进行认真整理、分析、研究、进行较为系统总结.结论肿瘤病的发生,与生态失衡,大气污染和毒物增加,慢性营养不良,慢性中毒,激素干扰、内分泌系统紊乱,免疫功能低下直接相关,而社会因素和个人不良生活习惯又是发病的诱因.以中医观点则认为:与脾肾双亏,水不涵木、血不养肝有关.肾、脾、肝三脏功能降低并失调,导致肝气郁结,气滞痰凝,气滞血瘀而发病.     

中医肿瘤病临床治疗探讨

目的整理,总结临床治瘤经验,不断强化治瘤措施,力求为肿瘤患者服务.方法通过四十余年的大量临床资料分析、对比、研究、总结,去伪存真,取其精华.不断丰富临床治疗手段,增强和提高治疗效果.结论中医肿瘤病治疗,应是综合系统地,辩证而施治,非单一性.重点在于“扶正固本”“利气破瘀”“温经通络”、“抗毒排毒”“软坚除痞”之法,“三合”“五位一体”“靶向”是其基本治疗原则和治疗大法.     

乳腺定位表达载体在小鼠乳腺中的活性检测

目的 检测乳腺定位表达载体在动物乳腺中的表达活力。方法与结果 将乳腺定位表达载体乳清酸蛋白(人组织型纤溶酶原激活剂（WAP-tPA）通过乳腺导管直接注入妊娠后期小鼠的乳腺中,待小鼠产子、泌乳后,检测出小鼠乳汁中tPA的表达量为80 ng/ml。结论 此方法可以作为从动物整体水平上检测乳腺定位表达载体表达效力的一种简便而有效的方法。