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孙誉芳李宁孟祥英王彰骄张羽飞乔晋娟 《中国病原生物学杂志》2019,(1):55-59
目的制备耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a(PBP2a)抗原的卵黄抗体IgY,建立检测MRSA的酶联寡聚核苷酸吸附试验(ELONA)方法。方法用大肠埃希菌原核表达并纯化PBP2a,采用胸部肌肉多点注射方式免疫产蛋母鸡,水稀释法粗提IgY,BCA法测定蛋白浓度,Western blot分析其特异性;以IgY抗体为捕获分子,以生物素标记的PBP2a特异性适配体为检测分子,建立检测MRSA的ELONA方法;对IgY包被量、生物素标记适配体用量及HRP标记链霉亲和素稀释度进行优化,测定该方法的灵敏度、特异性和重复性。结果成功表达和纯化PBP2a蛋白,Western blot显示IgY抗体能特异识别PBP2a蛋白。建立了检测MRSA的ELONA方法,其最佳包被用IgY稀释度为1∶1 600,生物素标记适配体用量为400nmol/L,HRP标记链霉亲和素稀释度为1∶2 000。优化的ELO-NA对MRSA的检测限为2.87×10~2 CFU/ml;重复性试验的变异系数为4.7%。用该方法检测34株临床分离的金黄色葡萄球菌,与梅里埃VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统分析结果一致性为100%。结论制备的抗MRSA PBP2a卵黄抗体具有较高特异性,基于该抗体建立的ELONA方法灵敏、特异、重复性好,可用于MRSA PBP2a的检测。 相似文献
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结核分枝杆菌是结核病的病原菌,利用基因编辑技术研究结核分枝杆菌未知基因功能,对于发现新的抗结核药物靶标、改进卡介苗或开发新疫苗具有重要的研究意义。本文就基因编辑技术在结核分枝杆菌研究中的应用作一综述。 相似文献
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正活性氧自由基(ROS)是一类具有强氧化作用的化学活性物质,广泛参与机体的生理与病理过程。机体在细胞正常新陈代谢过程中,在外源性化学致癌物质和辐照(X射线,γ-射线和紫外线)条件下可产生ROS,导致多种形式的DNA损伤:如碱基修饰、链内/间交联、链断裂、碱基丢失等。通常情况下,机体内一定数量自由基的存在是生物体维持正常生理功能所必需的,并且体内的抗氧化系统可以及时地清除多余 相似文献
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目的预测结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白α晶体蛋白(Rv2031c)的抗原表位。方法 BLAST在线分析Rv2031c与人类蛋白的同源性;利用DNAStar软件包中的Protean模块预测其B细胞和T细胞抗原表位;RANKPEP和SYPEPITHI在线预测辅助性T(Th)细胞抗原表位;SYFPEPI、BIMAS和Net CTL方法在线预测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。结果 Rv2031c与人类蛋白同源性较低,有8个潜在的B细胞抗原表位,7个候选Th细胞抗原表位和3个候选CTL表位。结论 Rv2031c含有较多潜在的人类B细胞、Th细胞和CTL抗原表位,可作为新的结核病疫苗研发的候选靶蛋白。 相似文献
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