人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究

目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×103左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。     

35例庚型肝炎临床及酶学变化观察

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的临床意义。方法应用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测１６５例肝炎患者血清ＨＧＶＲＮＡ和血清酶的变化。其中急性肝炎２４例，慢性肝炎７８例，肝硬化１８例，肝癌４例，乙、丙肝携带者４１例。结果在急性黄疸型肝炎中检出单纯性ＨＧＶ感染３例（１２５％），血清ＡＬＴ水平在４８８±６５Ｕ／Ｌ之间，ＡＳＴ在４５２±７１Ｕ／Ｌ之间，ＴＢｉＬ在７７１±１４３μｍｏｌ／Ｌ。急性肝炎酶的升高一般在１个月内降到正常，而ＨＧＶＲＮＡ在ＡＬＴ降到正常后仍持续一段时间才转阴，其中１例发病后９个月转阴。慢性肝炎中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性１９例（２４４％），其中单纯性ＨＧＶ阳性４例（５１３％）。肝硬化肝癌中ＨＧＶＲＮＡ阳性４例，其中１例肝硬化为单纯性ＨＧＶ阳性。结论在急性黄疸型肝炎、乙型肝炎病毒携带者、慢性肝炎、肝硬化以及肝癌中均可检出庚型肝炎病毒，为单独感染或与乙、丙型肝炎病毒同时或重叠感染，其传播途径与乙、丙型肝炎的传播途径相同。     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法

目的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５’－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶链反应，并初步应用于１５３例标本。结果该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测     

逆转录─巢式PCR在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒

逆转录┐巢式ＰＣＲ在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒谭文杰夏宁邵丛郁庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高。本室根据对ＨＧＶ与ＨＣＶ基因序列的分析，分别选取５′ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）区的两...     

乙型肝炎表面抗原不同突变体对细胞免疫的影响

目的　研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)不同突变体对细胞免疫的影响。方法　将野生型和变异型HBsAg基因重组质粒NS2 Swt、NS2 S12 6、NS2 S133、NS2 S14 1、NS2 S14 5分别转染CHO细胞,72h收获细胞上清。采用ELISA法检测各组细胞上清preS2 蛋白的表达量。将这些细胞上清刺激PHA活化的人淋巴细胞,MTS法检测不同变异株抗原对淋巴细胞增殖活性以及淋巴细胞分泌IFN γ、IL 10和IL 2的影响。结果　变异和野毒株(wt)各组细胞上清preS2 蛋白的表达量基本一致。变异和wt重组HBsAg刺激T细胞后,其上清MTS显色后的A4 90 值均高于空白组和pCI neo组,说明HBsAg中的蛋白可以促进T细胞增殖;T12 6S氨基酸变异HBsAg能够刺激IFN γ分泌增加;M133T氨基酸变异刺激IL 10分泌增加。结论　这4种乙型肝炎病毒(HBV)变异株感染人体后,机体对它们的细胞免疫反应可能不会有明显的增强或减弱,但也不能忽视T12 6S和M133T变异抗原改变了某些细胞因子的表达,可能对机体细胞免疫造成的潜在影响。     

庚型肝炎病毒NS5区优势抗原表位的表达及其抗原性的初步评价

目的 表达庚型肝炎病毒（HGV）基因且NS5区部分基因重组抗原，分析其抗原性。方法 分别亚克隆了HGV NS5a、NS5b以及NS5b与C区嵌和的基因至pThoiC表达载体上，构建成3个重组表达质粒，分别大肠埃希菌JM109（DE3），用IPTG诱导表达重组蛋白。表达产物经纯化后采用Western blot和间接ELISA方法分析3个重组蛋白的抗原性。结果 经酶切和序列分析鉴定正确，3种表达蛋白均高效表达且相对分子质量与预期大小相符。Western blot分析和间接ELISA试验表明，3种表达蛋白均能与抗－HGV阳性血清发生特异性反应。将应用重组蛋白检测的抗－HGV抗体与混合重组抗原（包括C区合成肽、NS5a合成肽、NS3区基因重组抗原）的检测结果进行了比较，在混合重组抗原阳性的22份血清中，P5a检出率为68％（15／22），P5b检出率为91％（20／22），Pc-5b检出率为73％（16／22）。在70份阴性标本中，3种抗原的检出率分别为P5a:7%(5/70);P5b:1%(1/70);Pc-5b:6%(4/70)。3个重组抗原单独检出阳性的标本，其中有一部分经RT－PCR检测亦为阳性。结论 原核表达的NS5区蛋白所检测的抗－HGV抗体不能完全被其他区段的抗原所覆盖，是免疫诊断HGV感染所必需的抗原表位之一。     

DNA免疫引起小鼠产生抗丙型肝炎病毒核壳区体液应答的初步研究

采用ｐｃＤＮＡ３与ｐＭＴ两种基因表达裁体，构建包含丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区（Ｃ区）或全结构基因区（核心区、包膜区）的质粒。经纯化后直接对Ｂａｌｂ／ｃ小鼠进行骨骼肌或尾部皮内注射，２～６ｗ后采血，用ＥＬＩＳＡ法检测小鼠抗核壳区的体液应答。结果表明：ＤＮＡ免疫可引起小鼠产生抗ＨＣＶ核壳区的体液应答，加强免疫２次后可使特异性抗体平均滴度达到１８００以上。提示ＤＮＡ免疫可作为丙型肝炎病毒感染的潜在防御手段。     

贺福立适甲型肝炎灭活疫苗的使用情况及保护效果

贺福立适甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(HavrixTM)历经10年的免疫推广和市场检验,证明该疫苗免疫原性强,一般人群接种后可获得持久保护,而慢性肝病或免疫缺陷者接种后同样也可产生保护性抗体.接种后监测资料已证实了其良好的安全性,而且证实其加强免疫的接种时机对免疫效果并无明显影响,为去甲肝高流行区的旅行者预防接种提供了方便.由于贺福立适甲肝灭活疫苗可在短期内使机体产生抗体,产生抗体所需的时间在甲肝潜伏期以内,因此可用于控制甲肝的爆发和暴露后的预防接种.由于中流行区甲肝病毒感染情况发生了明显转变,甲肝的免疫策略已发展为儿童、青少年普遍接种再加上高风险人群预防接种的策略.     

丙型肝炎病毒核壳蛋白在转基因小鼠中的表达及与Fas抗原关系的初步研究

将中国人丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）分离株的５’－非编码区和结构基因（５ＵＴＲ＋Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２）区基因插入到ｐｃＤＮＡ３载体中构成表达质粒，通过显微注射法将此质粒注射入Ｆ１代杂交鼠（Ｃ５７ＢＬ／６ＸＩＣＲ）受精卵，并植入假孕母鼠输卵管中，经筛选获得整合有目的基因的转基因小鼠系。免疫组化研究表明，ＨＣＶ核壳蛋白在转基因小鼠各组织中皆有表达，多呈核型染色，心肌细胞中可见浆型。核壳蛋白在各组织中的表达水平；心＞肺＞肾＞肝，同时在转基因小鼠心、肾、肝中检出Ｆａｓ抗原的表达，其表达水平与核壳蛋白的表达呈正相关关系。提示ＨＣＶ核壳蛋白的表达可引起Ｆａｓ抗原的表达。     

常见乙型肝炎病毒表面抗原突变体的抗原性分析

目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原突变株和野毒株对表面抗体结合能力的差异,探讨免疫漏检基因变异株的机制及对策。方法：应用基因重组技术构建HBsAg常见基因突变株和野毒株表达质粒,分别在COS－7细胞中瞬时表达,定量后用常规HBsAg免疫诊断试剂盒检测,观察重组抗原与不同抗－HBs的结合能力。结果：T126 S变异与单克隆抗体的结合力增高,G145R,K141 E和2株三位点同时变异株则明显下降,对M133T变异与单克隆抗体的结合力影响不大。变异株与多克隆抗体的结合力也有变化,但仍能检测到大部分变异株抗原。结论:“a”抗原决定簇氨基酸的置换影响了HBsAg与抗－HBs的结合能力,并且氨基酸的置换位置和特性对抗原性的影响各有不同。因此,建议应用HBsAg多克隆抗体或开发研制“免疫逃逸突变株”的特异性抗体,以完善HBsAg免疫诊断试剂的抗体组成,减少免疫诊断对常见基因变异株的漏检。