大鼠GDNF基因的克隆表达及对PC12工程细胞的影响

克隆与表达大鼠胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)并观察其对PC12工程细胞的影响。从新生4天的SD大鼠海马组织中提取总RNA，通过RT-PCR方法，扩增出GDNFcDNA。构建表达质粒pET-GDNF，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导GDNF表达并在Ni^2 -NTA柱上用一步复性法纯化和复性。把PCDNA3．0-GFRαl和pcDNA3．0-BET质粒双转染入PC12细胞，C-418筛选稳定克隆，构建PC12工程细胞。用GDNF刺激工程细胞，3天后观察其存活和分化。大鼠GDNFcDNA的克隆与表达获得成功，纯化和复性的重组GDNF蛋白可显著增强PC12-GFRαl—RET工程细胞的存活和分化。初步明确GDNF诱导PC12工程细胞存活和分化是通过RET-依赖途径。