肠出血性大肠杆菌O157∶H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Tir细胞骨架偶联蛋白(TccP)基因,并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC O157∶H7 Sakai菌株基因组扩增TccP基因,构建TccP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗TccP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Western blotting法进行测定和分析。结果从EHEC O157∶H7 Sakai菌株中克隆出了1014bp的TccP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达;以TccP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体,Western blotting分析此抗体能与TccP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TccP基因,所获TccP具有良好的抗原性,为进一步研究TccP在EHEC O157∶H7致病机制中的作用奠定基础。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7的分子生物学检测方法研究进展

肠出血性大肠杆菌O157：H7是一种新型人类病原菌，由它引起的感染严重威胁着人类健康和生命。对其进行分子流行病学调查，可为该病的预防、诊断和治疗提供有力的依据和参考。现就目前常用的几种大肠杆菌O157：H7的分子生物学检测技术作一简介。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7溶血素保护性片段(HlyAN436)克隆、表达、初步纯化与生物学活性研究

目的获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素（Ehx）保护性片段，并研究其基本的生物学及免疫学特性。方法PCR法从EHECO157-SMR2菌株克隆O157：H7的HlyA亚单位的N端片段（436个氨基酸），T-A克隆后构建表达载体pET-28a（＋）-HlyAN436，测序鉴定后转化到E.coliBL21（DE3），IPTG诱导表达，初步纯化后免疫动物。结果Hly-AN436成功地在大肠杆菌表达系统表达，动物实验证实其具有良好的免疫原性和反应性以及一定的免疫保护性。结论Hly-AN436蛋白有可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究。     

肠出血性大肠杆菌0157:H7感染动物模型的建立

目的　建立肠出血性大肠杆菌O15 7:H7感染小鼠动物模型。方法　不同大小(5、7和9周龄)的Balb/c小鼠分别随机分成3组,先以链霉素处理3d ,再分别以不同剂量(1×10 10 CFU和1×10 9CFU)经口感染具链霉素抗性的0 15 7:H7 SMR2菌株,进行临床观察和微生物学、病理学检查。结果　5和7周龄实验组小鼠在感染后2～5d有33%～83%死亡,肾、肝、肺和肠道出现不同程度的病理变化,所有实验组未死小鼠粪便排菌时间在13～2 2d以上。结论　小鼠感染O15 7后可表现出人类感染O15 7所出现的主要临床症状和病理变化,对研究EHEC的致病机制和疫苗研究有重要意义。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因诊断及多重PCR SCCmec基因分型方法的建立

目的建立对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因诊断和金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)基因分型的方法。方法对临床分离的11株金黄色葡萄球菌采用双重PCR(femA和mecA)鉴定,再将鉴定为MRSA的临床菌株和3株标准株用多重PCR方法在一个反应体系(针对MRSA的8个基因)中进行SCCmec基因分型。结果临床分离株中有6株鉴定为MRSA,对其和MRSA标准株的多重PCR基因分型结果显示,两株临床株为SCCmecⅡ型,4株为Ⅲ型,标准株SA-w2为Ⅰ型,MRSA252为Ⅱ型。结论该研究可以很好地对临床MRSA进行基因诊断和分型,对MRSA的诊断和分型、耐药研究以及分子流行病学有重要意义。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测方法研究进展

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新型人类病原菌,由它引起的感染严重威胁着人类健康和生命。对其进行分子流行病学调查,可为该病的预防、诊断和治疗提供有力的依据和参考。现就目前常用的几种大肠杆菌O157:H7的分子生物学检测技术作一简介。     

肠出血性大肠杆菌O157的实验室分离与鉴定方法

大肠杆菌O157是一种重要的食源性病原菌。对该菌进行分离鉴定,继而进行进一步分子水平的深入研究具有重要意义。本文就该菌的目前常用的实验室分离鉴定方法,如平板分离、免疫磁珠分离、聚合酶链式反应等进行了综述,并对各种分离鉴定的方法进行了比较。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7 TccP基因克隆、表达及其抗原性鉴定

目的克隆表达肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7Tir细胞骨架偶联蛋白（TeeP）基因，并研究其抗原性。方法采用PCR法自EHEC0157：H7Sakai菌株基因组扩增TeeP基因，构建TeeP原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经初步纯化后，免疫新西兰白兔，制备兔抗TeeP多克隆抗体。抗体效价及特异性用ELISA法和Westernblotting法进行测定和分析。结果从EHECO157：H7Sakai菌株中克隆出了1014bp的TeeP基因。构建的重组质粒pET28a-TccP在大肠杆菌中获得了高效表达；以TeeP免疫家兔获得了高效价多克隆抗体，Westernblotting分析此抗体能与TeeP发生特异性抗原抗体反应。结论在大肠杆菌中成功克隆表达了TeeP基因，所获TeeP具有良好的抗原性，为进一步研究TeeP在EHECO157：H7致病机制中的作用奠定基础。