中国人圆锥角膜患者的TGFBI基因编码区点突变及多态性的检测和分析

目的 检测中国人圆锥角膜患者TGFBI基因编码区点突变及单核苷酸多态性特点,探讨TGFBI基因与圆锥角膜的关系.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性和DNA直接测序技术,对30例圆锥角膜患者、30名正常对照外周血TGFBI基因编码区的17个外显子,进行了点突变和单核苷酸多态性的检测和分析.结果 共发现2种TGFBI基因碱基变异,位于第12外显子,均为杂合性.1例圆锥角膜患者在TGFBI基因密码子535位点发生GGA→TGA置换,引起甘氨酸突变为终止密码(G535X),在对照组中未检出此突变;2例圆锥角膜患者和1名健康对照者在TGFBI基因密码子540位点发生TTT→TTC置换,不引起编码的苯丙氨酸改变(F540F),系TGFBI基因的多态性改变.结论 中国圆锥角膜人群存在着TGFBI基因变异,提示TGFBI基因在圆锥角膜的发病中可能起一定的作用.

Abstract：

Objective To investigate the point mutations and polymorphisms of transforming growth factor β-induced gene (TGFBI) in Chinese patients with keratoconus and discuss the relationship between the feature of gene mutations and single nucleotide polymorphisms of TGFBI gene and keratoconus. Methods Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism and DNA direct sequencing were performed in 30 keratoconus cases and 30 healthy controls. All 17 exons of the TGFBI gene were analyzed for point mutations and single nucleotide polymorphisms. Results Totally two heterozygous nucleotide changes were identified in exon 12 of the TGFBI gene. The codon 535 is changed from GGA to TGA in 1 patient, leading to a substitution of glycine to a stop codon at the protein level (G535X). The codon 540 is changed from TTT to TTC in 2 patients and 1 control individual, resulting in a nonsense mutation (F54F),and is a single nucleotide polymorphism of the gene. Conclusion Mutation and polymorphisms of the TGFBI gene were detected in Chinese patients with keratoconus in this study. The results suggest that TGFBI gene might play an important role in the pathogenesis of keratoconus.     

中国人圆锥角膜患者的TGFBI基因编码区点突变及多态性的检测和分析

Objective To investigate the point mutations and polymorphisms of transforming growth factor β-induced gene (TGFBI) in Chinese patients with keratoconus and discuss the relationship between the feature of gene mutations and single nucleotide polymorphisms of TGFBI gene and keratoconus. Methods Polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism and DNA direct sequencing were performed in 30 keratoconus cases and 30 healthy controls. All 17 exons of the TGFBI gene were analyzed for point mutations and single nucleotide polymorphisms. Results Totally two heterozygous nucleotide changes were identified in exon 12 of the TGFBI gene. The codon 535 is changed from GGA to TGA in 1 patient, leading to a substitution of glycine to a stop codon at the protein level (G535X). The codon 540 is changed from TTT to TTC in 2 patients and 1 control individual, resulting in a nonsense mutation (F54F),and is a single nucleotide polymorphism of the gene. Conclusion Mutation and polymorphisms of the TGFBI gene were detected in Chinese patients with keratoconus in this study. The results suggest that TGFBI gene might play an important role in the pathogenesis of keratoconus.     

补虚怯瘀方抗衰老作用的实验研究

目的　观察补虚怯瘀方的抗衰老作用。方法　小鼠碳廓清法、红细胞溶血素生成法、T淋巴细胞的转化测定及小鼠应激试验、血清及肝脏 MDA测定。结果　补虚怯瘀方剂能提高小鼠单核 -巨噬细胞系统 (RES)对碳粒的廓清率 (P<0 .0 5) ,能促进绵羊红细胞 (SRBC)致小鼠红细胞溶血素的生成 (P<0 .0 5) ;对小鼠 T淋巴细胞的转化率和小鼠应激能力及耐疲劳能力均有提高作用 (P<0 .0 5) ;能降低四氧嘧啶(TOP)诱发的小鼠过氧化脂质 (MDA)水平 (P<0 .0 1 )。结论　补虚怯瘀方能提高小鼠的免疫调节功能 ,能增进小鼠的应激能力、耐疲劳能力 ,能降低四氧嘧啶 (TOP)诱导的小鼠过氧化脂质升高 ,具有延缓机体衰老的作用     

杭州地区结核分枝杆菌利福平耐药基因突变特征分析

在全球范围内,结核分枝杆菌耐药率不断上升,高耐药率和耐多药菌株不断出现和传播,对化疗疗效及结核病流行产生很大影响.利福平(RFP)作为一种主要的抗结核药物,若对其耐药常常导致化疗失败,因此快速检测RFP耐药菌株对了解细菌耐药性具有较大意义.     

免疫相关的三磷酸鸟苷酶家族结构及其在细胞自噬过程中的作用进展

自噬是细胞通过单层或双层膜包裹待降解物形成自噬体,然后运送到溶酶体形成自噬溶酶体并进行多种酶的消化及降解,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新.细胞对这种合成与降解的精细调节,对维持细胞的自身稳态有重要意义[1-2].同时,通过自噬,真核细胞也可以抵御病原菌的入侵,在机体的免疫、感染、炎性反应过程中以及肿瘤、心血管病、神经退行性病的发病中起着十分重要的作用.     

中药消臌方利水消臌作用的机制研究

目的 观察中药消臌方(简称方剂)的利水消臌作用并探讨作用机制。方法 中药提取；尿液Na 制定；Griess法血清NO浓度制定；肠腹膜扫描电镜制样及计算机图像处理系统定量分析腹膜淋巴孔。结果 中药消臌方剂能提高尿液Na 的排泄(P＜0．01)；能增加肠腹膜淋巴孔面积、密度和周长(P＜0．01)；中药消臌方剂诱导的小鼠血清一氧化氮(NO)升高能被一氧化氯合酶(NOS)抑制剂(L-硝基精氨酸)抑制(P＜0．01)。结论 中药方剂通过刺激活化NOS诱导机体内源NO升高实现利水消臌作用。     

消臌方的利水消臌作用及与一氧化氮介导功能的关系

腹水,属中医臌胀范畴.引起原因复杂,治疗颇为棘手.本文以肝纤维化小鼠为动物模型,观察由党参、泽泻、白术、丹参及益母草五味中药组成的消臌方的利水消臌作用,并观察该方利水消臌作用与一氧化氮(NO)介导作用之间的关系.     

二参泽术汤对腹膜淋巴孔的影响及腹水转归机理的研究

目的:研究二参泽术汤对腹膜淋巴孔的调控作用和治疗腹水的意义,并应用NO供体 (硝普钠)和一氧化氮合酶 (NOS)抑制剂 (N^G-单甲基-L-精氨酸),观察NO的淋巴孔舒张作用和对腹水转归影响,探讨二参泽术汤对腹膜淋巴孔的调控机制。方法:应用CCl4 法建立小鼠肝纤维化模型;用扫描电镜观察,并使用计算机与扫描电镜联机的图像处理系统测定腹膜淋巴孔的变化;用全自动生化分析仪测定尿离子浓度。结果:①二参泽术汤可明显促进腹膜淋巴孔开放面积增大,周长和分布密度增加 (P <0.01),尿中Na⁺ 、K⁺ 、Cl^-排出增多 (P <0.05或P <0.01);②二参泽术汤对腹膜淋巴孔的调控和对腹水转归的作用可以被NO供体和NOS抑制剂增强或抑制。结论:①二参泽术汤能调控腹膜淋巴孔,促进腹膜腔内液体转归,使尿中Na⁺ 、K⁺ 、Cl^-排出增加,减轻水钠潴留,具有良好的消腹水作用;②二参泽术汤调控腹膜淋巴孔,促腹水转归机制,可能与内源性NO的变化存在着密切的关系.     

散发性视网膜色素变性视紫红质基因突变筛查

目的研究中国人散发性视网膜色素变性（sporadic retinitis pigmentosa，SRP）患者视紫红质（rhodopsin，RHO）基因突变频率及特征，揭示其在SRP发病机制中的潜在作用。方法运用聚合酶链反应一单链构象多态性（polymerase chain reaction—single—strand conformation polymorphism，PCR—SSCP）结合DNA测序技术，对80例SRP患者和80例健康对照者进行RHO基因5个外显子的突变筛查。结果SRP患者RHO基因5个外显子PCR扩增产物经SSCP分析后，发现其电泳带型与对照组一致，均包括2条单链带和1条双链带，且电泳迁移率相同，即在患者和对照组中均未检测到RHO基因突变。结论中国人SRP患者RHO基因外显子的突变率较低；PCR—SSCP分子遗传学方法快速、简单、灵敏，适用于大批量RP患者的基因变异筛查。（中国眼耳鼻喉科杂志，2008，8：351—353）     

中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的研究

目的 研究中国人散发性先天性巨结肠症内皮素受体B基因的特征，探讨内皮素受体B基因与先天性巨结肠症发病的关系。方法 收集散发性先天性巨结肠症病例75例和正常对照40例，通过盐析法从外周血中提取DNA，应用聚合酶链反应-单链构象多态性和变性高效液相色谱技术，对内皮素受体B基因的第1a、1b和4外显子进行分析，并通过DNA测序确定阳性样本的碱基改变方式。结果 6个病例在第4外显子上存在多态性改变，改变方式均为碱基75487位点上G→A的置换(Leu277→Leu)，发生率为8．0％(6／75)。正常对照样本该位点没有此种变化。所有病例的第1a、1b外显子均无异常改变。结论 中国人散发性先天性巨结肠症患儿中可检测到内皮素受体B基因的多态性改变，内皮素受体B基因是先天性巨结肠症的易感基因。