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1.
由于免疫原性,鼠源性单克隆抗体在人体疾病治疗方面受到限制,运用基因重组技术,将抗体轻链、重链可变区基因连接,构建单链Fv(ScFv)基因.表达制备ScFv片段,由于其分子小,免疫原性弱,有潜在应用前景.本实验将获得的抗人肺癌单克隆抗体轻重链可变区基因,通过Linker基因序列连接并克隆至pIg20表达载体,表达制备抗人肺癌scFv融合蛋白.现报道如下.l 材料与方法1.1 抗人肺癌单克隆抗体3D_3(McAb3D_3)重链可变区基因(VH)克隆至表达载体pIg20,以SmaⅠ,XbaⅠ分别双酶切VH及pIg20质粒,以粘末端方式,将SmaⅠ-VH-Xba片段连接到pIg20载体,连接产物电穿孔法转染BL21菌,筛选鉴定.阳性子命名为pIgVH.1.2 将McAb3D_3轻链可变区基因(VL)克隆至pIgVH,以BgLⅡ、NcoⅠ分别消化中pIgVH及VL,以粘 相似文献
3.
4.
5.
6.
目的探讨miR-301a对巨噬细胞炎症因子表达水平的影响,从microRNA角度阐明动脉粥样硬化的发病机制,为动脉粥样硬化的防治提供新的思路。方法高脂喂养Apo E-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,收集小鼠主动脉血管,利用real-time PCR检测组织中miR-301a的表达水平;利用脂质体在RAW264.7细胞中转染miR-301a mimic和miR-301a inhibitor,用real-time PCR检测细胞中miR-301a水平,并检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达水平,用Western blot检测NF-κB抑制因子(NKRF)蛋白水平,用免疫荧光染色检测p65细胞定位。结果在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a的表达水平升高;在RAW264.7细胞中过表达miR-301a可抑制NKRF蛋白水平,促进p65细胞核定位,升高细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达;在RAW264.7细胞中低表达miR-301a可升高NKRF蛋白水平,促进p65细胞质定位,减少细胞中TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达。结论在高脂喂养的Apo E-/-小鼠主动脉血管壁组织中miR-301a表达水平升高;在RAW264.7细胞中miR-301a通过调节NKRF的表达影响p65活性进而调控TNF-α、IL-6和MCP-1的mRNA表达,提示microRNA在动脉粥样硬化发病的炎症机制中具有重要作用。 相似文献
7.
目的 探讨蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)在肿瘤坏死因子(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导JNK磷酸化中的作用.方法 TNF-α处理人肝癌细胞HepG2,免疫印迹检测JNK磷酸化水平和PP4表达水平,免疫沉淀结合磷酸酶活性测定法分析PP4活性变化.构建PP... 相似文献
8.
目的了解肝细胞癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMC)人类白细胞抗原G(HLA—G)的表达水平。方法收集38例HCC患者、25例肝硬化患者和40名健康查体者的PBMC,分别用逆转录一聚合酶链反应(PCR)和流式细胞术(FCM)检测其HLA—GmRNA和HLA—G蛋白表达水平。结果HCC组、肝硬化组和健康对照组PBMCHLA—GmRNA表达率分别为94.7%、84.0%和87.5%,差异无统计学意义(P=0.359);HCC组HLA—G蛋白表达率高于肝硬化组和健康对照组,差异有统计学意义(P=0.002)。HCC组PBMCHLA—G蛋白主要表达于CD4^+细胞上。结论HCC患者PBMCHLA—G蛋白表达率升高,其机制与临床意义尚待进一步研究。 相似文献
9.
本文测定了35名血脂正常老人和35名老年高甘油三酯血症患者血清载脂蛋白(Apo)AI、B的含量及极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)分子中ApoCⅡ,CⅢ_0,CⅢ_1,CⅢ_2的百分比。与正常对照组比较.高甘油三酯血症组的ApoB,VLDL-ApoCⅢ_1,CⅢ_2和HDL-ApoCⅢ_1显著增加,ApoAⅠ,HDL-ApoCⅢ_2和VLDL-ApoCⅢ_0显著下降,但ApoCⅡ沒有明显的变化。ApoB、VLDL-ApoCⅢ_1水平与TG呈正相关。ApoAⅠ、VLDL-ApoCⅢ_0水平与TG呈负相关。本文还讨论了ApoAⅠ、B、CⅡ、CⅢ_0、CⅢ_1、CⅢ_3含量变化与高甘油三酯血症发生的关系 相似文献
10.
高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)均非单一的脂蛋白颗粒,按颗粒大小,HDL可大致分为HDL2和HDL3,LDL分为LDLa和LDLb。大量研究显示,HDL和LDL亚类可能是比HDL和LDL更有效的心血管病危险预示指标。测定HDL和LDL亚类的方法有多种,但定量不够准确、不同方法结果缺乏可比性。脂蛋 相似文献