大鼠肝抑素样提取物的生物效应初探

从大鼠肝分离出小分子蛋白质,注入肝大部切除的大鼠体内。术后24h制备肝细胞悬液及骨髓细胞悬液,用流式细胞计测定细胞DNA含量。结果:①实验组大鼠每克体重注入肝提取物10～300μg,一致呈现4n肝细胞DNA复制受阻于G_1期,各类肝细胞数与正常大鼠的相似;②对照组大鼠,4n肝细胞由正常的68.1％降至30.9％,8n肝细胞由6.3％骤增至25.3％,并出现16.8％的4n～8n间8期肝细胞;③两组大鼠的骨髓细胞DNA含量均无变化。表明肝提取物中含有肝抑素样物质,它特异性地使再生肝的4n肝细胞增殖周期阻滞于G_1期及S早期。     

脂质体转染AFP基因构建树突状细胞肝癌瘤苗及体外活性检测

目的：探讨以ＡＦＰ为靶点，构建ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗及其抗肝癌免疫治疗的可能性。方法：应用脂质体将ＡＦＰ基因转染体外培养的未成熟 ＢＭＤＣ，构建 ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗，以流式细胞术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、３Ｈ－ＴｄＲ法和 ＭＴＴ法等检测其免疫活性。结果：ＡＦＰ－ＤＣ瘤苗不仅能产生和分泌ＡＦＰ，而且能上调自身的Ｂ７分子和ＭＨＣ分子，明显刺激Ｔ细胞增殖及提高ＣＴＬ的杀伤作用。结论：提示肝癌相关基因ＡＦＰ可作为抗肝癌基因治疗的切入点。     

小鼠趋化因子CXCL10真核表达载体的构建

应用RT—PCR方法，从小鼠脾脏T细胞的mRNA中，扩增获得编码小鼠趋化因子CXCL10的cDNA，并加上人单核细胞趋化蛋白1的信号肽基因，将其克隆到Pucm—T载体，经酶切及测序鉴定，进而构建CXCL10重组真核表达载体。采用脂质体法体外转染COS-7真核细胞，经Western blot和趋化指数检测，转染细胞能够表达CXCL10蛋白，其上清对淋巴细胞具有趋化作用。CXCL10的真核表达载体构建成功，为进一步研究其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。     

树突状细胞负载前列腺癌细胞抗原后的抗肿瘤免疫作用

目的 探讨小鼠树突状细胞(DC)负载前列腺癌细胞株RM-1的裂解产物后，诱导特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其抗肿瘤的免疫作用。方法 将RM-1细胞的裂解产物(T-lysate)作为肿瘤抗原负载小鼠骨髓来源的DC，构建DC瘤苗(T-lysate／DC)，采用流式细胞术和四唑氮蓝(MTT)还原法检测其免疫活性；ELISA法检测其诱导细胞因子白介素(IL)-2和γ-干扰素(IFN-γ)的作用；体内实验检测DC瘤苗的抗肿瘤免疫治疗作用和免疫保护作用。结果 DC负载RM-1细胞的裂解产物后，其主要组织相容性复合物(MHC-Ⅰ、Ⅱ)及共刺激分子(B7-1、B7-2)的表达明显增高；T-lysate／DC能够诱导小鼠产生RM-1特异性CTL，使细胞上清液中IL-2和IFN-γ水平升高，对小鼠具有免疫保护作用，并能有效抵抗肿瘤细胞的攻击；经T-lysate／DC治疗的荷瘤小鼠瘤体生长减慢，存活期延长，瘤体出现坏死和炎细胞浸润。结论 DC负载前内腺细胞解产物后，能够有效诱导搞肿瘤免疫反应，为前列腺癌的临床治疗提供了新策略。     

肝癌患者用生物免疫制剂后单核细胞及枯否细胞体外抗人肝癌细胞效应

15例肝癌患者施行外科治疗,12例兼用卡介苗、混合菌苗及干扰素,3例不用免疫治疗为对照。分离患者血单核细胞(MC)与淋巴细胞(LC)及肝枯否细胞(KC),以人肝癌细胞株为靶细胞(TC)。结果:①首次用免疫制剂7d后,MC对TC抑增殖作用及杀伤作用明显高于用药前,3次用药后MC抑TC效应提高至84％,对照组的仍为45％;②首次用药后7d,KC对TC的抑增殖率和杀伤率分别较对照组高0.5倍和1倍;③用免疫制剂后,血T细胞总数及Th数持续升高,T_s则显著下降。研究表明三联免疫制剂可有效地增强患者抗肝癌细胞的免疫功能。     

血管树突状细胞在人主动脉粥样硬化早期病变中的分布

目的：探讨血管树突状细胞在人早期动脉粥样硬化(AS)病变中的分布模式。方法：人主动脉标本15例主要取自尸检和外科手术，常规连续切片，分别行HE及S100／CD1a免疫细胞化学染色，光镜下观察S100／CD1a阳性细胞分布情况。结果：15例HE染色标本中，2例正常，13例人动脉血管可见内膜的增厚及泡沫细胞等AS早期病理表现。9例S100／CD1a染色阳性，阳性率为69．2％。S100／CD1a阳性细胞分布在病变的内膜和外膜，外膜的S100／CD1a阳性细胞主要分布在滋养血管的周围。结论：在AS早期病变部位有血管树突状细胞的聚集，主要分布在病变血管的内膜和外膜，提示血管树突状细胞可能参与了AS早期的免疫反应。     

DC融合瘤苗治疗大鼠腹腔播散性卵巢癌

目的:研究树突状细胞(DC)与卵巢癌融合的融合瘤苗对大鼠腹腔播散性卵巢癌的治疗作用,并观察其体内应用的安全性。方法:用聚乙二醇法将Fischer344(F344)大鼠骨髓来源的DC与卵巢癌上皮细胞株NuTu19细胞在体外融合制备融合瘤苗(DCNuTu19)。流式细胞术检测DCNuTu19的免疫相关表型。将DCNuTu19接种于F344大鼠皮下,观察它在体内的成瘤性。用乳酸脱氢酶释放法检测经过DCNuTu19免疫的大鼠脾细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对NuTu19细胞的杀伤作用。复制腹腔播散性卵巢癌的F344大鼠模型,观察DCNuTu19对它的治疗作用。结果:DCNuTu19高表达主要组织相容性复合物II(MHCII)分子OX6、共刺激分子B72、细胞间粘附分子ICAM1和大鼠DC的标志性抗原整合素OX62。与NuTu19相比,DCNuTu19在大鼠体内成瘤率降低,成瘤时间延迟,两组平均瘤重具有统计学差异(P<0.05)。经DCNuTu19免疫的大鼠脾CTL对NuTu19细胞的杀伤活性显著增高(P<0.01)。与对照组相比,经DCNuTu19治疗后大鼠的病情发展速度减缓,生存期明显延长(P<0.01)。结论:卵巢癌DC融合瘤苗能显著提高大鼠CTL杀伤活性,诱导高效而特异的抗卵巢癌免疫效应,延长患有腹腔播散性卵巢癌大鼠的生存时间。     

肝再生大鼠血清诱导骨髓干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的观察肝大部切除大鼠再生血清和肝细胞生长因子(HGF)诱导骨髓干细胞向肝实质细胞分化的作用；探讨骨髓干细胞向肝细胞分化和增殖的体外培养条件和方法，为患者应用自身骨髓细胞修复损伤肝脏提供实验依据。方法制作肝大部切除大鼠肝再生动物模型，收集术后24h血清；分别应用鼠肝再生血清和HGF对大鼠骨髓细胞进行定向诱导分化培养；以免疫组化、RTPCR和western blot等方法对分化不同阶段细胞进行检测。将分化细胞经尾静脉输入同系大鼠，观察输注细胞在肝、脾内的生长情况。结果活体移植分化细胞能定向迁移至肝和脾；体外及体内分化细胞在mRNA水平和蛋白质水平均表达白蛋白，并在一定时期内表达甲胎蛋白。结论大鼠骨髓干细胞在肝大部切除再生血清或HGF的诱导下能横向分化为肝实质样细胞。     

人外周血分离树突状细胞前体分离培养及其分化成熟过程中生物特征的变化

用从人外周血分离、纯化、扩增树突状细胞的方法,对树突状细胞成熟过程中的功能分化作初步探讨.以酵母菌、HRP吞噬实验测试树突状细胞的内吞能力;以同种混合淋巴细胞反应检测细胞的免疫刺激能力.结果显示,在GM-CSF或GM-CSF与IL-4联合培养2～3天后,树突状细胞无或仅有极弱的吞噬酵母菌能力,但能活跃内吞HRP.培养5天的树突状细胞内吞HRP能力减弱.但能有效的刺激T细胞增殖,GM-CSF与IL-4联合作用后的树突状细胞,其内吞HRP能力及刺激T细胞能力均强于单用GM-CSF培养的树突状细胞.由此可见,树突状细胞在分化成熟的不同阶段表现出不同的功能,GM-CSF与IL-4联合培养能明显增强树突状细胞功能.