p27kip1过表达对肝细胞癌细胞株细胞周期的影响

目的探讨肿瘤抑制基因p27^kip1编码的P27蛋白过表达与HCC细胞株细胞周期的关系。方法本研究从野生型p27^kip1基因真核表达质粒pEYFP-P27（WT）出发,采用定点诱变技术构建了突变型p27^kip1基因表达载体pEYFP-P27（S10A）、pEYFP-P27（T157A）和pEYFP-P27（T187A）,然后用脂质体法将上述质粒转染HCC细胞株HepG2和Hep3B,Western Blotting检测内源和转入的P27蛋白表达,流式细胞仪检测P27蛋白过表达对HCC细胞株细胞周期的影响。结果野生型和3种突变型的P27融合蛋白在HepG2和Hep3B中的过表达都能增强G0／G1期阻抑;同时,对HepG2细胞,核定位位点突变体P27（T157A）比野生型P27蛋白及其他两个突变体具有更强的细胞周期阻抑活性,而对Hep3B细胞,3个突变体和野生型p27蛋白对细胞周期的影响无明显差异。结论P27蛋白过表达能够显著增强HCC细胞株的G0／G1期阻抑。     

ssp411基因敲除小鼠生育表型的初步研究

目的对ssp411基因的生育功能进行初步研究。方法利用PB转座子插入建立小鼠模型ssp411基因敲除小鼠各基因型之间交配后,检查雌鼠生殖道是否见栓。记录出生小鼠的窝仔数,性别,出生20 d仔鼠体质量、基因型等数据;记录出生后90 d雄仔鼠的睾丸重量,进行组织形态学研究,并对附睾尾精子进行活力分析。结果 ssp411缺陷型雌鼠可以正常生育,而雄鼠无自然生育能力。ssp411基因敲除雄鼠能够与母鼠自然交配形成阴道栓,但是没有子代出生,且在交配后母鼠输卵管壶腹部未见精子。睾丸的组织形态学研究和睾丸称量结果表明,ssp411蛋白缺失可以影响精子的生成。ssp411基因敲除雄鼠的附睾精子活力也明显差于对照组。结论 ssp411基因缺陷不影响雌性生殖,但影响雄鼠的精子生成功能,造成少弱精子症,并引起雄性不育。