CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

HPV58E6基因的克隆及体外表达

目的克隆并体外表达HPV58E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础.方法通过PCR方法从HPV58全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV58E6蛋白,化学发光法检测,X光胶片曝光显影鉴定.结果酶切电泳证实质粒构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相当于HPV58E6分子量约18.8kD的位置出现条带,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带.结论成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,为其致癌作用和治疗的研究奠定基础.     

RP-HPLC法测定六味地黄丸中没食子酸的含量

目的:建立 RP-HPLC 法测定六味地黄丸中没食子酸含量的方法。方法:色谱柱:日本岛津 GL Sciences Inc.C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%醋酸水溶液(30∶70),流速:1mL·min~(-1),检测波长为273nm。结果:没食子酸在4-40μg·mL~(-1)范围内,峰面积积分值与浓度呈良好的线性关系(r=0.9995);平均回收率为99.5%,RSD 为2.1%。结论:该法准确、快速、灵敏,重复性好。     

原因不明发热患者L型细菌的血培养研究

对临床上４４例原因不明发热、青霉素治疗无效的患者进行了血普通培养和Ｌ型细菌培养。结果表明，普通培养细菌的阳性率为１８％，Ｌ型细菌培养阳性率为３６％（０．０２５＜Ｐ＜０．０５）。药敏试验结果表明，从同一患者血中分离培养出的细菌和Ｌ型细菌对药物的敏感性不同。因此，临床上对长期发热而青霉素治疗无效的患者，应及时做血普通培养和Ｌ型细菌培养并根据药敏结果综合用药     

HPV16L1-E7重组腺病毒载体疫苗免疫BALB/c小鼠的研究

目的:探讨人乳头瘤病毒16型L1-E7重组腺病毒载体疫苗的免疫效应。方法:①将rAd5HPV16L1-E7载体疫苗在293细胞中扩增后,以肌肉注射、腹腔注射、滴鼻和灌胃途径免疫小鼠,采用ELISA法测其血清IgG抗体水平;②制备脾细胞悬液,加入到96孔无菌培养板中,并分别加入rAd5HPV16L1-E7特异性蛋白和RPMI1640 10%胎牛血清,加入3H-TdR1μCi/孔,做T-细胞增殖实验;③取经过培养56h的培养液进行IFN-γ的测定。结果:不同途径免疫的BALB/c小鼠血清IgG抗体水平均高于对照组(P<0.05),但以肌注组产生抗体量最多,IFN-γ和T-细胞增殖亦高于对照组(P<0.05)。结论:rAd5HPV16L1-E7重组活病毒疫苗既能刺激T-细胞产生细胞介导的免疫应答,又能刺激B-细胞产生抗体介导的免疫应答,说明其具有很好的免疫原性。     

嗜酸乳杆菌作用人巨噬细胞后对其抗宫颈癌细胞作用影响的研究

目的 诱导获得人外周血巨噬细胞(Mф),研究嗜酸乳杆菌作用Mф后对其抗肿瘤效应的影响及机制.方法 自正常人外周血分离获得单核细胞,体外rhGM-CSF诱导培养,观察细胞形态并检测其相关表型;利用MTT法检测所诱导Mф对宫颈癌细胞HeLa的直接抑瘤效应;ELISA法检测其培养上清中TNF-α及IL-12的含量.结果 诱导7 d的贴壁细胞具有典型的Mф形态,流式分析显示为分化成熟的Mф;体外细胞毒实验显示:嗜酸乳杆菌活菌状态和热灭活状态以10:1、1:1与Mф相互作用后能够显著增强Mф对HeLa细胞的杀伤作用(P<0.05).激活后的Mф在一定效靶比为10:1时其肿瘤抑制率最大,与LPS阳性对照相比,其抗瘤活性差异不存在显著性(P>0.05);经嗜酸乳杆菌活菌和热灭活菌作用的Mф能显著提高IL-12和TNF-α两种细胞因子的分泌量,而且存在剂量依赖性,与空白对照组比较差异存在显著性(P<0.05).结论 两种生物状态的嗜酸乳杆菌均能够增强人Mф抗宫颈癌细胞作用.     

急性白血病患者院内细菌L型感染的临床研究

目的 研究细菌Ｌ型在急性白血病医院感染中的作用。方法 ５０例急性白血病伴医院感染患者分别取血、痰、中段尿作普通细菌及细菌Ｌ型同步培养。结果 痰普通培养阳性率１２％，痰Ｌ型培养阳性率６％，中段尿普通培养阳性率４％，尿Ｌ型培养阳性率８％；血普通培养阳性率８％，血Ｌ型培养阳生率６％。结论 加做Ｌ型培养能提高急性白血病患者细菌感染的检出率。     

乳酸杆菌与阴道微生态关系的研究进展

微生态是一门新兴的学科，近年来随着科技的迅猛发展，医学微生态已成为一门独立的边缘学科，并日益受到人们的重视。女性阴道从生理学角度上讲是一个闭合的体腔，其内包含着多种成分，也寄生着许多细菌。最近几年，人们研究了女性健康和病理状态下的阴道微生态，如细菌性阴道病、白色念珠菌性阴道病和滴虫性阴道炎等，     

HPV16 L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究

目的：探讨嵌合性病毒样颗粒HPV16 L1－E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法：以本室构建的HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB／c小鼠，在初次免疫后，分别于第3，4，5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV16L1蛋白，检测特异性DHT反应，在末次免疫2周后，取小鼠脾细胞，用HPV 16 L1－E7蛋白刺激，检测T细胞增殖反应及血清IFN－γ水平。结果：HPV16 L1－E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV16 L1抗体及特异性DTH反应，加强免疫后，抗体水平升高，两者水平均高于对照组（P＜0．01），HPV16 L1－E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞，在特异性HPV16 L1－E7蛋白抗原刺激下，特异性T淋巴细胞明显增殖，被免疫小鼠血清中出现高水平IFN－γ。结论：嵌合母亲产颗粒HPV16 L1－E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体，HPV16L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子，这为研究预防HPV感染和治疗HPV相关性肿瘤的疫苗提供了实验资料。     

应用随机扩增多态DNA技术鉴定淋球菌L型的临床意义

淋球菌在感染过程中 ,受体内外多种因素的影响易转变成 L型。稳定的 L型在体内不易回复成细菌型 ,且 L型缺壁后其许多生物学特性与原菌存在一定差异 ,因此用常规细菌鉴定方法对其菌种难以鉴定 ,从而影响了其临床针对性治疗。随机扩增多态 DNA(RAPD)技术是以多聚酶链反应 (PCR)为基础 ,利用随机引物和基因组 DNA模板 ,在较低温度下配对 ,延伸而获得产物。我们运用 RAPD-PCR技术将已知的淋球菌及其 L型进行同源性对比研究 ,旨在建立一种快速、特异、简便的细菌 L型鉴定方法。现报告如下。资料与方法 :1菌种 :淋球菌 L型为本院临床…