hCGb-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达

目的:在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白。方法:将(CTP)n(n=3,4)基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后,克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6(CTP)n(n=3,4)3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果:在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物,Westernblot结果显示它们的分子量分别为125kD和138kD左右。结论:运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-(CTP)n(n=3,4)-3C3d融合蛋白,为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。     

hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4在大肠杆菌中的表达及纯化

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中表达hCGβ-(CTP)_4、hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4融合蛋白,并对蛋白进行分离纯化。方法:将pBSMR-(CTP)_4中的(CTP)_4基因片断克隆入表达载体pET-28a(+),得到表达质粒pET-28a(+)-(CTP)_4。将PCR获得的补体C3d-P28 DNA序列以头尾串连的方式构建四聚体。将(C3d-P28)_4基因片断克隆入pBSMR-(CTP)_4,得到pBSMR-(CTP)_4-(C3d-P28)_4,进一步得到表达质粒pET-28a(+)*(CTP)_4-(C3d-P28)_4。将表达质粒pET-28a(+)-(CTP)_4和pET-28a(+)-(CTP)_4- (C3d-P28)_4分别转化入大肠杆菌BL21(DE3),表达融合蛋白hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4。采用Ni-NTA-resin和凝胶过滤方法纯化蛋白。结果:菌株经IPTG诱导后检测到目的基因的表达产物, SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白的分子量分别为27kD和40kD左右。结论:在BL21 (DE3)中成功表达了hCGβ-(CTP)_4和hCGβ-(CTP)_4-(C3d-P28)_4融合蛋白,并确立了纯化方法,为进一步研究其免疫原性和应用于抗肿瘤疫苗奠定了基础。     

癌细胞表面表达人绒毛膜促性腺激素的免疫荧光检测

目的筛选可供体外和动物体内肿瘤抑制试验的候选癌细胞株。方法通过间接免疫荧光法，用兔抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)多克隆免疫球蛋白(IgG)和小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白(IgG)，对人结(直)肠癌细胞(HCT15、HCT116、KM12、WiDr、LoVo、LS-174)、前列腺癌细胞(PC3)、小细胞肺癌细胞(A549)的细胞表达hCG情况进行检测。结果被检的8个癌细胞株均对兔抗hCG多克隆免疫球蛋白(IgG)呈阳性反应。其中4株结(直)肠癌细胞(HCT115、HCT116、Lo-Vo、LS-174)和小细胞肺癌(A549)能被小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白染色。结论这5株能与小鼠抗hCG单克隆免疫球蛋白结合的细胞株都适用于以后的肿瘤杀伤试验。     

亚甲蓝对精子运动及质膜完整性的影响

体外研究发现亚甲蓝( methylene blue,MB)会抑制人精子的活力[1].为进一步研究MB对精子的毒性作用,我们通过低剂量MB与人精子共孵育2h的体外实验以及高剂量MB连续灌服大鼠14 d的在体实验,观察MB对精子生成、精子活力以及精子质膜完整性的影响.     

hCGβ-CTP多聚体-3C3d融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达

目的：在巴氏毕赤酵母细胞中表达hCGβ-（CTP）n（n=3，4）-3C3d融合蛋白。方法：将（CTP）n（n=3，4）基因与分子佐剂C3d基因的三聚体连接后，克隆入载体pPIC9K得到表达质粒pPIC9Khis6（CTP）n（n=3，4）3C3d,经限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序确认后电转入酵母细胞中进行表达。结果：在酵母细胞内检测到目的基因的表达产物，Western blot结果显示它们的分子量分别为125 kD和138 kD左右。结论：运用巴氏毕赤酵母表达系统成功表达了hCGβ-（CTP）n（n=3，4）-3C3d融合蛋白，为进一步研究其免疫原性和用作抗肿瘤疫苗奠定了基础。