KIF1B在瘦素促进妊娠早期绒毛滋养细胞MMP-2表达中的作用

 目的 观察瘦素对妊娠早期绒毛滋养细胞基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响,探讨驱动蛋白家族成员1B（KIF1B）在瘦素对MMP-2调控中的作用。方法 正常妊娠妇女人工流产绒毛组织（6~9周）,按常规分离获得滋养细胞,分为对照组、leptin（100 和500 μg/L）刺激组以及KIF1B-siRNA、leptin（100 和500 μg/L）分别+KIF1B-siRNA组,24 h后,明胶酶谱检测上清MMP-2的表达,RT-PCR检测MMP-2 mRNA、瘦素长型受体（OB-Rl）mRNA及KIF1B mRNA表达,Western blot检测KIF1B蛋白表达。结果 与对照组相比,瘦素（100 和500 μg/L）显著促进滋养细胞MMP-2表达（100 μg/L: mRNA水平由0.11±0.02增至0.18±0.05,P<0.05）;瘦素以剂量依赖方式促进OB-Rl及KIF1B表达（P<0.05）;KIF1B-siRNA部分抑制瘦素对MMP-2分泌的促进作用。结论 瘦素可能通过leptin R-KIF1B途径促进MMP-2分泌,从而促进妊娠早期滋养细胞侵袭,为阐明滋养细胞侵袭调控机制提供了新的基础数据。     

瘦素对HTR8-SVneo细胞增殖的影响及调控机制

目的研究瘦素(Leptin)对HTR8-SVneo滋养细胞系增殖的影响及对DNA结合和分化抑制剂(ID)分子表达水平的影响,探讨Leptin对HTR8-SVneo细胞增殖作用的调节机制。方法体外培养HTR8-SVneo滋养细胞,MTT法检测Leptin不同质量浓度(0、10、50、100、250、500 ng/mL)刺激后细胞增殖情况。HTR8-SVneo细胞培养体系中加入Leptin(0、100、500 ng/mL),RT-PCR检测瘦素受体(Leptin R)各亚型表达,实时定量PCR检测ID分子表达,Western Blot检测ID2表达。SiRNA干扰ID2分子后,分为Leptin(0 ng/mL)、Leptin(100 ng/mL)、Leptin(500 ng/mL)、Leptin(0 ng/mL)+ID2-siRNA、Leptin(100 ng/mL)+ID2-siRNA、Leptin(500 ng/mL)+ID2-siRNA,MTT检测Leptin对HTR8-SVneo滋养细胞增殖的影响。结果与Leptin(0 ng/mL)比较,高质量浓度Leptin(100、250、500 ng/mL)促进HTR8-SVneo细胞增殖(P<0.05);HTR8-SVneo细胞表达除HuB219.2外的全部受体亚型;Leptin以剂量依赖方式促进HTR8-SVneo细胞ID2分子及OB-RL表达(P<0.05);ID2-siRNA抑制ID2表达并逆转Leptin对滋养细胞增殖的促进作用。结论 Leptin可能通过Leptin R-ID2途径促进HTR8-SVneo细胞增殖,为阐明滋养细胞增殖调控机制提供了新的基础数据。     

正常早孕及稽留流产患者NK细胞中整合素αvβ3的表达分析

目的分析正常早孕妇女和稽留流产患者外周血及蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+自然杀伤(NK)细胞比率以及细胞表面整合素αvβ3的表达。方法分别采集15例正常早孕妇女和7例稽留流产患者外周血和蜕膜组织,Ficoll密度梯度离心法分离单个核细胞悬液,流式细胞术检测样本CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率以及其细胞表面αvβ3表达。结果 与早孕妇女外周血相比,蜕膜组织中CD56+CD16-NK细胞比率增高而CD56+CD16+NK细胞的比率却降低(P<0.01);正常早孕妇女及稽留流产患者外周血和蜕膜组织中CD56+CD16-和CD56+CD16+NK细胞的比率均无差异(P>0.05)。与正常早孕妇女相比,稽留流产患者蜕膜组织CD56+CD16-NK细胞表面αvβ3阳性表达率降低而其平均荧光强度(GM)值却增高(P<0.05)。结论 NK细胞及其所表达的整合素αvβ3在早孕期胚胎植入及胎盘形成过程中发挥重要作用,稽留流产患者NK细胞表面整合素αvβ3的表达异常,可能是稽留流产发生的免疫致病因素。     

肝素及低分子肝素对脑血管病患者血中妊娠相关血浆蛋白A浓度的影响

目的 探讨临床脑血管疾病治疗中应用的肝素和低分子肝素对血清学标志物PAPP.A浓度的影响,为进一步准确评价PAPP-A的临床意义提供依据.方法 选取山东大学齐鲁医院2009年11月至2010年5月收入院的40例脑血管病患者,分别采集药物注射前后的血标本.按照治疗方法及肝素和低分子肝素的用药情况分成4组:A组,10例皮下注射低分子肝素抗凝患者,注射前、治疗第1天、第2天和第7天注射后3 h以及末次注射后24 h分别抽取静脉血.B组,10例未用低分子肝素抗凝患者,入院时、入院第1天、第2天和第7天抽取静脉血.C组,10名肝素抗凝支架治疗患者,造影前、注射肝素前、注射肝素后第3、5、15、40和100分钟从动脉鞘管抽取动脉血.D组,10例未用肝素抗凝造影患者,造影前和造影完成后分别从动脉鞘管抽取动脉血.用ELISA方法检测各组标本中PAPP-A浓度,分析不同处理组组间差异及组内各时间点间的差异.结果 A组患者PAPP-A 浓度呈时间依赖性,随着给药天数的增加逐渐从注射前的12.36(9.90～14.32)mIU/L升高至第7天21.80(23.50～19.73)mIU/L,差异有统计学意义(M=38.72,P<0.01).C组患者静脉注射肝素后PAPP-A浓度5 min内由12.86(9.67～14.05)mIU/L升高至51.56(44.20～66.00)mIU/L,差异有统计学意义(M=46.06,P<0.01).皮下注射低分子肝素1周后A组PAPP-A的浓度为21.80(23.50～19.73)mIU/L,高于B组的11.81(9.21～12.89)mIU/L,差异有统计学意义(U<0.001,P<0.01).C组静脉注射肝素15 min时PAPP-A的浓度为43.70(37.70～54.30)mIU/L,高于D组造影后的14.18(11.25～15.86)mIU/L,差异有统计学意义(U<0.001,P<0.01).皮下注射低分子肝素后血中PAPP-A的峰值比静脉注射肝素的峰值低,A组与C组分别为21.80(23.50～19.73)、51.56(44.20～66.00)mIU/L,差异有统计学意义(U=0.999,P<0.01).结论 脑血管疾病临床治疗中应用肝素和低分子肝素会导致血中PAPP-A浓度的升高,选用PAPP-A作为评价指标时应考虑药物的影响.

Abstract：

Objecfive To investigate the effects of treatment for cerebrovascular disorder patients with heparin and low molecular weight heparin(LMWH) on serum PAPP-A concentrations and provide the basis for evaluating the clinical significance of PAPP-A in the following study.Methods Forty cases with cerebrovascular disease from Qilu Hospital from November 2009 to May 2010 were collected in this study.Blood samples were taken before and after drug administration.All cases were divided into four groups according to situation of medication.Group A consisted of 10 patients who received subcutaneous LMWH anticoagulation therapy, and blood samples were collected before LMWH injection, three hours after subcutaneous LMWH anticoagulation therapy in the first day, the second day and the seventh day and 24 hours after the last injection. Group B consisted of 10 patients who did not receive LMWH therapy, and blood samples were collected immediately after admission, the first day, the second day and the seventh day after admission. Group C consisted of 10 patients with percutaneous carotid intervention who received intravenous heparin at the beginning of stenting, and blood samples were collected from the arterial sheath just before angiography and heparin administration, and at 3, 5, 15, 40 and 100 min after heparin administration. Group D consisted of 10 patients who received carotid angiography but LMWH-free therapy,and blood samples were collected from the arterial sheath just before and after angiography. Serum PAPP-A concentrations were analyzed by ELISA to evaluate the differences of intra-groups and differences at different time points of inter-groups. Results In group A, PAPP-A concentrations were time dependent and elevated gradually from 12. 36 (9. 90-14. 32) mIU/L before LMWH injection to 21.80 (23.50-19.73) mIU/L at the seventh day after injection (M=38. 72, P < 0.01 ). In group C, there was a rapid increase of PAPP-A concentration from 12. 86 ( 9. 67-14. 05 ) mIU/L to 51.56 ( 44. 20-66. 00 ) mIU/L within 5 min after intravenous heparin injection (M=46. 06, P <0. 01 ). The PAPP-A concentration of one week after LMWH administration in group A was 21.80 (23.50-19.73) mIU/L, significantly higher than that in group B [11.81 (9. 21-12. 89) mIU/L] (U<0. O01, P<0.01). The PAPP-A concentration at 15 min after heparin administration in group C was 43.70 (37.70-54. 30) mIU/L, significantly higher than that after angiography in group D [14. 18 (11.25-15. 86) mIU/L] ( U<0. 001, P <0. 01 ). The peak level of blood PAPP-A after subcutaneous LMWH injection was significantly lower than that after intravenous heparin injection. The concentrations in group A and C were 21.80 ( 23.50-19. 73 ) and 51.56 (44. 20-66. 00) mIU/L respectively, and had a significant difference ( U=0. 999, P < 0. 01 ) . Conclusions Both intravenous heparin and subcutaneous LMWH administration induce an increase in serum PAPP-A concentration. The effect of drug should be considered when PAPP-A is selected as an evaluation indicator.     

血清细胞外囊泡hsa＿circ＿0005075在复发性流产中的表达及临床意义

目的 分析复发性流产(RSA)患者血清细胞外囊泡(EVs) hsa＿circ＿0005075的表达水平及临床意义。方法 收集山东大学齐鲁医院妇产科就诊的14例RSA患者和14例正常妊娠者(对照组)为训练集,64例RSA患者和48例对照为验证集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组间血清EVs中hsa＿circ＿0005075的表达水平,并分析其与RSA患者临床病理参数的关系。采用电化学发光法检测血清中甲状腺球蛋白抗体(A-TG)、抗甲状腺过氧化物酶自身抗体(A-TPO),化学发光免疫分析法检测血清抗心磷脂(ACA)抗体(IgA、IgG、IgM)、抗β2GP1抗体(IgA、IgG、IgM)水平;采用Person相关分析血清EVs hsa＿circ＿0005075与上述临床指标的关系;采用ROC曲线评估血清EVs hsa＿circ＿0005075对RSA的临床应用价值。结果 训练集检测结果显示,血清EVs hsa＿circ＿0005075在RSA组中的表达水平[7.69(4.74,42.15)]显著高于对照组[1.02(0.51,4.23)],差异有统计学意义(U=28,P<...     

黏蛋白MUC13对胃癌预后及生物学行为的影响

目的 ：探讨黏蛋白MUC13在胃癌（GC）患者中的预后价值以及对GC细胞生物学行为的影响。方法：TCGA数据库分析MUC基因在GC组织中的表达水平。采用Spearman秩相关分析MUC基因之间表达的相关性,GO功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集探究MUC基因潜在的生物学功能。基于单因素COX回归筛选与GC预后显著相关的MUC基因。通过免疫荧光检测MUC13的表达水平,并分析其与GC预后等临床病理特征的关系。siRNA敲低GC细胞中MUC13后,利用CCK-8、集落形成以及Transwell实验观察其对GC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：MUC1、MUC2、MUC3A、MUC4、MCU5B、MUC12、MUC13等基因在GC组织中表达均显著上调（P<0.05）,主要富集在消化系统过程、上皮结构维持、顶端质膜、唾液分泌等途径。其中,MUC13与GC患者的不良预后（Log-rank P<0.05）、年龄（P<0.001）及肿瘤大小（P=0.035）密切相关。细胞学实验表明敲低MUC13后,GC细胞的增殖能力明显下降（P<0.05）,但迁移和侵袭能...     

MB-WCX联合SELDI-TOF-MS在胃癌诊断中的应用

目的 研究WCX纳米磁珠联合表面增强激光解析电离化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)对胃癌及其癌前病变诊断的意义。方法 应用纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS对26例胃癌、35例癌前病变患者(萎缩性胃炎15例,胃溃疡20例)及30例正常人血清标本进行分析,Swiss蛋白数据库搜索鉴定差异蛋白,建立诊断模型。结果 与健康对照相比较,质荷比为2741.2、7963.6和15904.3的蛋白质分子随病变程度表达上调,质荷比为13732.6的蛋白质在癌前病变组无统计学差异,但在胃癌患者中下调。质荷比2741.2、7963.6、15904.3及13732.6的蛋白质组成的诊断模型可以准确鉴别胃癌与正常对照,敏感性为92.3%,特异性为96.7%。结论 WCX纳米磁珠联合SELDI-TOF-MS是筛选胃癌早期诊断标志物的有效手段,2741.2、7963.6、15904.3及13732.6的蛋白质组成的诊断模型有可能成为潜在的胃癌早期诊断标志物。     

血浆可溶性sHLA-G检测对胃癌早期诊断的意义

目的 检测可溶性人类白细胞抗原G ( sHLA-G)在胃癌及癌前病变患者血浆中的表达水平,并探讨其临床诊断意义。方法 采用ELISA法检测82例胃癌患者(胃癌组)、39例胃上皮内瘤变患者(胃上皮内瘤变组)、36例萎缩性胃炎患者(萎缩性胃炎组)、52例浅表性胃炎患者(浅表性胃炎组)及67名健康对照者(健康对照组)血浆中sHLA-G水平,同时检测血浆癌胚抗原(CEA)水平,分析二者对胃癌早期诊断的意义及sHLA-G与胃癌临床病理参数间的关系。结果 胃癌组血浆sHLA-G水平明显高于胃上皮内瘤变组、萎缩性胃炎组、浅表性胃炎组及健康对照组(P均<0.001);胃上皮内瘤变组血浆sHLA-G水平明显高于健康对照组(P<0.05)。胃癌组血浆CEA水平明显高于其他各组(P均<0.01)。sHLA G作为诊断指标的ROC曲线AUC为0.814,其诊断价值高于CEA (0.692,P=0.01)。sHLA-G和CEA联合检测的ROC曲线AUC为0.846,明显高于sHLA-G或CEA(P＜0.05;P<0.001)。ROC曲线确定sHLA-G诊断临界值为101.37U/mL,其敏感度为73.2%,特异度为82.5%,阳性预测值为63.8%,阴性预测值为87.9%,准确性为79.7%。胃癌患者血浆sHLA-G水平与患者年龄及肿瘤大小密切相关(P均<0.05),而与患者性别、分化类型、浸润程度、淋巴结转移及临床分期无关(P均>0.05)。结论 血浆sHLA-G可能参与了胃癌的发生和发展,检测其表达水平有助于早期发现胃癌及癌前病变,血浆sHLA-G有可能成为临床胃癌早期诊断的一个潜在性指标。     

蜕膜间充质干细胞免疫调节作用及临床应用研究进展

蜕膜间充质干细胞除了具有间充质干细胞一般表型及分化潜能外,还具有低免疫原性等独特性质,是一种多能基质细胞。蜕膜间充质干细胞不但为妊娠期间胚胎植入提供适宜环境,而且通过表达免疫调控因子与多种免疫细胞相互作用,如T细胞、NK细胞及DC等,发挥其在胚胎植入、免疫耐受建立及正常妊娠维持中的重要作用。目前蜕膜间充质干细胞已经应用于造血干细胞移植、再生治疗等,具有较高的临床应用价值。本文就蜕膜间充质干细胞的来源、特征、功能及临床应用前景等进行综述。     

低氧微环境下内质网应激及其相关疾病

内质网应激是细胞应激的重要组成部分,是真核细胞的一种保护性反应。氧分压改变（如低氧）是重要的应激条件,显著影响细胞的生物学表型及细胞行为（生存、迁移及侵袭等）。细胞通过内质网应激降低胞内未折叠蛋白的浓度,抑制未折叠蛋白凝集的发生。近来发现内质网应激与肿瘤、糖尿病及炎症等多种疾病的发生、发展密切相关,组织局部的低氧微环境是这些疾病的特征之一。因此对低氧导致的内质网应激的发生及其机制的研究,对肿瘤、心血管疾病及糖尿病等疾病治疗新策略的发展具有重要意义。