基因Cdca2敲除对小鼠精子发生和生育力无明显影响

目的 探究睾丸高表达细胞分裂周期相关蛋白2基因(Cdca2)在小鼠精子发生和生育力中的生理功能。方法 通过Q-PCR和Western blot检测Cdca2在小鼠不同组织部位的表达情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre-loxP介导的重组系统构建Cdca2组织特异性敲除的小鼠品系;通过苏木精-伊红(HE)染色和形态学分析了解小鼠CDCA2缺失对精子发生的各个阶段生精细胞形态的影响;通过精子全自动检测分析系统检测小鼠CDCA2缺失对精子活率及运动参数的影响;通过生育力测试实验检测CDCA2缺失对雄性小鼠生育能力的影响。结果 Cdca2是一个睾丸高表达的基因;利用CRISPR/Cas9技术和生殖系统特异性Cre的工具鼠,成功获得了Cdca2生殖细胞特异性敲除的小鼠;小鼠CDCA2缺失对精子发生中各阶段生精细胞、精子运动参数及雄性生育能力的影响改变无统计学意义。结论 基因Cdca2对于小鼠精子发生和雄性生育力的维持可能是非必需的。     

精子膜蛋白的研究Ⅱ.具有同种抗原性的兔精子膜蛋白A的免疫活性及理化性质

本文研究了兔精子膜蛋白A的免疫功能.发现其抗体在体外具有凝集精子的作用,如将此蛋白注入雄兔体内,可影响其精子的生成.作者还报告了兔精子膜蛋白A的分子量、等电点、N-末端及氨基酸组成等理化性质。     

应用酵母双杂交法对人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区作用配体的筛选

ＹＷＫⅡ蛋白质是本实验室发现的一种具有单一跨膜结构的精子膜蛋白,由胞外区、疏水的穿膜区和胞内区组成。其ｃＤＮＡ序列全长３６５７ｂｐ,命名为ＨＳＤ２,开放阅读框（ＯＲＦ）长２２８９ｂｐ,编码７６３个氨基酸。实验证明,胞外区部分结构具有较强的抗生育作用,而胞内段能在细胞水平上与Ｇｏ蛋白特异结合。为了寻找ＹＷＫⅡ蛋白质可能的作用配体,本实验系用酵母双杂交系统对睾丸文库进行筛选。将ＹＷＫⅡ蛋白质胞外段近膜区２２６个氨基酸与转录因子Ｇａ１４的ＤＮＡ结合域（ＢｉｎｄｉｎｇＤｏｍａｉｎ,ＢＤ）构成融合…     

睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响

目的 研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响.方法 利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因.纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体.通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测.结果 电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功.小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子.TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段.结论 HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生.     

睾丸表达新基因HSD-28的克隆及其编码蛋白质的研究

目的 研究从人初级精母细胞特异EST文库中克降的新基因HSD-28及编码蛋白质在精子发生过程中的表达及可能发挥的功能.方法 利用根据本实验室构建的人初级精母细胞特异EST文库,通过电子克隆方法,从网络数据库资源获取基因HSD-28.纯化原核表达系统表达的HSD-28蛋白,以此免疫新西兰白兔制备针对HSD-28的特异性多克隆抗体.采用免疫组化的方法研究HSD-28在人睾丸组织中的表达定位.最后,利用酵母舣杂交系统筛选与HSD-28相互作用的蛋白质.结果 克隆得到了的HSD-28基因,提交GenBank获得登陆号为AY251533,全长为641个碱基,其中开放阅读框为504碱基,编码一个由168个氨基酸构成的蛋白质,命名为HSD-28蛋白.将构建的pET-30a-HSD-28重组质粒转化到BL21(DE3)宿主菌,表达并纯化了HSD-28蛋白,大小约为28kDa.免疫组织化学结果显示,HSD-28蛋白特异的定位于人精原细胞和早期初级精母细胞.筛选得到与HSD-28相互作用的两个阳性克隆45#和106#.结论 从人睾丸cDNA文库中成功克隆得到HSD-28基因,其编码蛋白质表达定位于人精原细胞和初级精母细胞中,可能参与精子发生过程中减数分裂的调节.     

多组学分析发现LAMC2是调节泛癌微环境的关键因子

目的 利用多种数据库对多黏连细胞外基质蛋白LAMC2进行了系统分析,多组学数据证明LAMC2是影响患者肿瘤发生和临床预后的关键分子.方法 利用数据库分析了各种肿瘤及正常组织中LAMC2的蛋白质和RNA的表达量.并且比较了不同肿瘤类型间的LAMC2表达量与肿瘤患者生存间的关系,并进行免疫浸润分析;比较了在不同肿瘤类型中L...     

全转录组测序分析精子发生中RNA结合蛋白质的动态表达

目的 系统解析RNA结合蛋白质(RBPs)在小鼠精子发生中的动态表达全貌、阶段特异性及协同表达模式,并预测其潜在调控作用.方法 整合6种类型生精细胞的全转录组测序数据,分析精子发生全程差异表达的RBPs;利用时间序列分析软件(STEM)分析差异表达RBPs动态表达模式;利用加权基因共表达网络分析(WGCNA)鉴定精子发...     

BS－84人精子膜蛋白基因的研究（简报）

ＢＳ－８４人精子膜蛋白基因的研究（简报）陈东，缪时英，刘孟元，王航，王琳芳（中国医学科学院，中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）ＢＳ－８４是不育者血清中存在的一种抗精子抗体的相应抗原，分子量为８４０００，位于...     

基于转录组测序鉴定自噬在小鼠精子发生过程中的动态变化

目的基于NCBI数据库中的小鼠精子发生3个时期(精原细胞、粗线期精母细胞、圆形精子)的转录组测序(RNA-Seq)数据,系统地揭示自噬通路及自噬相关基因在精子发生过程中的动态变化规律。方法从GEO数据库中下载精子发生3个时期的RNA-Seq数据(GSE100964),对相邻阶段的差异表达基因分别进行代谢通路富集分析。从Autophagy Database里面取出783个自噬相关基因,对其中在精子发生3个时期的平均表达值大于1的636个自噬相关基因的表达量进行热图展示。结果发现精原细胞和粗线期精母细胞之间的差异表达基因可以显著富集到自噬通路和自噬相关的通路,而粗线期精母细胞和圆形精子之间的差异表达基因不能富集到自噬相关通路。此外,还发现636个自噬相关基因在精子发生过程中有3种主要表达模式。结论自噬在精子发生减数分裂起始前后的RNA水平发生了显著的变化,且自噬相关基因在精子发生过程中呈阶段特异表达。     

一种人精子膜蛋白基因的克隆与鉴定

应用本实验室制备的抗人精子膜蛋白的单克隆抗体(YWK-Ⅱ),自大鼠睾丸λgtll表达型cDNA库中表位筛选了一个阳性克隆,其插入cDNA长度为1.8kb,命名为RSD-2。RSD-2片段的部分酶谱分析确定该片段具有PstⅠ及BglⅡ的单一酶切位点和PvuⅡ等酶的多个位点。此外,采用RNA-DNA杂交技术还研究了RSD-2片段的种属特异性,表明人及大鼠睾丸间有较高的同源性。