NDRG3表达对前列腺癌细胞生长及抗药性的促进作用

目的:探讨NDRG3在人体前列腺细胞中的表达及外生性NDRG3对前列腺癌细胞的致癌潜能。方法:将NDRG3表达质粒稳定转染人类PC3前列腺癌细胞株,用一个NDRG3稳定表达亚克隆与做为对照的亲代和空质粒转染的PC3细胞,通过RT-PCR技术检测NDRG3基因在不同PC3人体前列腺细胞株中的表达情况。结果:NDRG3蛋白在2种前列腺癌细胞(PC3和DU145)和一种永生化前列腺间质细胞(WPMY-1)中都有表达,外源性的NDRG3能够显著地促进PC3细胞的增长率;NDRG3表达抑制美伐他汀引起的细胞凋亡。结论:NDRG3具有肿瘤促进功能并在前列腺癌的发生、发展中起一定作用。     

除透明带糖蛋白-C外杆状病毒表达的重组人ZP糖蛋白-B也能诱导获能精子顶体胞吐作用

现有资料表明不同物种的透明带（ZP）主要由3种糖蛋白组成。其或依据SDS-PAGE中迁移率被分别命名为ZP-1、ZP-2和ZP-3。或按mRNA转录物大小命名为ZPA、ZPB和ZPC。就人类而言．有实验表明重组糖基化或非糖基化人ZPC（hZPC）与获能人精子共孵育都能诱导顶体胞吐作用。鉴于不可能从天然源获得高纯度各ZP蛋白的事实。因此为了进一步了解人类受精过程中ZP糖蛋白的作用。本研究尝试用大肠杆菌和真核杆状病毒表达系统获得3种重组人ZP蛋白。进而开展相关功能研究。     

NDRG3对前列腺癌细胞致癌潜能的影响

目的：研究过表达外源性和RNA干扰内源性NDRG3对前列腺癌细胞克隆形成的影响。方法：将NDRG3表达质粒稳定转染人类PC3前列腺癌细胞株,用1个NDRG3稳定表达亚克隆与做为对照的亲代和空质粒转染的PC3细胞进行克隆形成实验;同时利用RNA干扰技术沉默CL-1细胞的内源性NDRG3,并用Western blotting技术进行鉴定,在对照组、GFP-siRNA组和NDRG3-siRNA组进行克隆形成实验。结果：过表达外源性NDRG3的PC3细胞形成的克隆数明显多于亲代和空质粒转染的PC3细胞株;在RNA干扰实验中,CL-1对照组和GFP-siRNA组形成的总克隆数和大克隆数均明显多于NDRG3-siRNA组（P<0.05）。结论：NDRG3可以提高前列腺癌细胞的致癌潜能和克隆形成能力。     

除透明带糖蛋白-C外杆状病毒表达的重组人ZP糖蛋白-B也能诱导获能精子顶体胞吐作用

现有资料表明不同物种的透明带(ZP)主要由3种糖蛋白组成,其或依据SDS-PAGE中迁移率被分别命名为ZP-1、ZP-2和ZP-3,或按mRNA转录物大小命名为ZPA、ZPB和ZPC。就人类而言,有实验表明重组糖基化或非糖基化人ZPC(hZPC)与获能人精子共孵育都能诱导顶体胞吐作用。鉴于不可能从天然源获得高纯度各ZP蛋白的事实,因此为了进一步了解人类受精过程中ZP糖蛋白的作用,本研究尝试用大肠杆菌和真核杆状病毒表达系统获得3种重组人ZP蛋白,进而开展相关功能研究。结果:SDS-PAGE和蛋白印迹分析揭示Ni-NTA亲和层析纯化的糖基化hZPA、hZPB…     

人卵透明带蛋白huZP3a~(22～176)和huZP3b~(177～348)肽段在大肠杆菌中的表达及其纯化

目的:探索将huZP3a22~348蛋白编码基因拆分成两段,分别表达的可行性,并研究表达产物的免疫原性。方法:用PCR技术, 将去N-端信号肽和C-端跨膜区的huZP322~348蛋白编码基因拆成大小相近的两段, 以完整阅读框的形式分别重组插入热诱导型pBV221的多克隆区。结果:大肠杆菌分别特异地表达了可单独或复合应用的huZP3a22~176和huZP3b177~348,在经过抗人ZP3不同抗原区合成肽抗体的蛋白印迹鉴定后, 用改良的制备性PAGE方法分离纯化这两种表达产物。同时用兔抗猪ZP IgGs蛋白印迹试验表明, huZP3a和pZP3b的几个共同线性抗原表位都存在于其肽链的前半区域。结论:通过基因重组技术可获得足够量的huZP3a和huZP3b,这为开展huZP3a和huZP3b的免疫原性以及huZP3诱发人精子顶体胞吐的功能域等研究奠定了基础。