中国人的HLA纯合细胞的DR_5分子双相凝胶电泳的多态性分析

本文应用O'Farrell建立并改进的NEPHGE和SDS-PAGE双相凝胶电泳方法分析了4株中国人HLA纯合细胞的DR_5抗原的多态性。用Iodogen法标记抗原,然后用单抗进行免疫沉淀,得到DR_5抗原后进行双相凝胶电泳,同时还将一株国外参考细胞HVB的DR_5抗原进行电泳并比较其格局。结果表明SMY-129A,SMY-129B属于DR_(w11)而SMY-43A及SMY-124D可能与DR_(w12)有关。     

大肠癌细胞p53基因突变与细胞凋亡及细胞倍性的关系

目的　了解ｐ５３ 基因突变、细胞倍性、细胞凋亡三者的关系,探讨突变型ｐ５３ 基因在肿瘤发生中的作用机制。方法　采用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ（ 单链构象多态性） 检测ｐ５３ 基因突变,用流式细胞仪 Ｆａｃｓｃａｎ 检测大肠癌细胞染色体倍性、凋亡率及其在细胞周期各相中的分布情况。结果　大肠癌标本ｐ５３基因突变率为５０ ％ ;其中突变组肿瘤细胞凋亡率（２２ ．１１ ％ ） 明显低于未突变组细胞凋亡率（４０ ．５７ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;突变组异倍体细胞百分率（ 占７６ ．９ ％ ） 明显高于未突变组（ 占４６ ．２ ％ ） ,（ Ｐ＜ ０ ．０５） ;异倍体肿瘤细胞凋亡率为３４ ．０ ％ ,二倍体肿瘤细胞凋亡率为４０ ．７ ％ ,二者差异无显著性（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。结论　ｐ５３ 基因突变使肿瘤细胞凋亡率下降,进而促进肿瘤发生、发展。ｐ５３ 基因突变多见于异倍体细胞,细胞凋亡率与细胞倍性无关。     

粘附分子CD44v6表达和p53基因突变与卵巢癌转移关系的研究

目的　探索卵巢癌粘附分子CD44的变构体CD44v6表达和p5 3基因突变与卵巢癌转移之间的关系和作用机理。方法　选择正常卵巢 2 0例、良性卵巢肿瘤 2 0例、卵巢癌 45例 (其中 2 0例肿瘤无转移 ,2 5例肿瘤有转移 ) ,应用流式细胞仪测定卵巢癌细胞DNA含量及其在细胞周期各相中的分布 ;应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)及特异探针D3 对卵巢癌细胞进行DNA印渍杂交分析 ,并对杂交条带进行辉度扫描 ;应用银染聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术检测卵巢癌细胞p5 3基因突变 ,并与正常卵巢和良性卵巢肿瘤进行比较。结果　正常卵巢、良性卵巢肿瘤、卵巢癌无转移和有转移者CD44v6表达阳性率分别为 0 %、10 %、75 %、88% ;而p5 3基因突变率分别为 0 %、5 %、40 %、6 0 % ,两者都呈逐渐上升趋势。CD44v6辉度扫描 ,卵巢癌无转移者 (382 0± 2 89)与有转移者(10 132± 15 2 1)比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。卵巢癌CD44v6表达阳性和阴性患者中 ,G2 M期细胞平均值分别为 5 .90 %和 5 .0 6 % (P >0 .0 5 ) ;异倍体细胞分别为 5 7%和 5 0 % (P >0 .0 5 )。而在p5 3基因有突变和无突变患者中 ,G2 M期细胞分别为 11.15 %和 5 .85 % (P <0 .0 5 ) ;异倍体细胞分别为 74%和 36 % (P <0 .0 5 )。结论　CD44v6表达与     

CD44基因拼接体、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间关系的机理研究

目的:探讨大肠癌CD44v6表达、p53基因突变和染色体倍性与大肠癌转移之间的关系和作用机理.方法:流式细胞仪测定大肠癌细胞倍性及其在细胞周期各相中的分布;RT-PCR方法及特异探针D3对大肠癌细胞进行Southern Blot,并对杂交条带进行辉度扫描;银染PCR单链构象多态性(SSCP)技术检测大肠癌细胞p53基因突变.结果:正常对照、良性腺瘤、肿瘤未转移和肿瘤转移组其CD44v6阳性率和p53基因突变率呈逐渐上升趋势,CD44v6辉度扫描表明肿瘤未转移组(2 317.26±198.73)和转移组(10024.16±855.40)相比较,表达量有显著差异(P＜0.02);CD44v6阳性和阴性两组中G2M期细胞均值分别占6.24%和5.48%(P＞0.05),异倍体细胞分别为62.16%和60.00%(P＞0.5);而p53基因突变和未突变两组中G2M细胞占10.33%和4.01%(P＜0.05),异倍体细胞分别为85.20%和30.00%(P＜0.005);肿瘤异倍体细胞转移率显著高于二倍体细胞.结论:CD44v6的表达与转移高度相关,CD44v6和p53基因突变与肿瘤转移关系可能涉及不同的作用机理.CD44v6与p53基因突变相比较而言,CD44v6不失为一个更好的肿瘤转移标记.     

主动免疫治疗对原因不明习惯性流产患者T辅助细胞1、2型细胞因子平衡的影响

本研究采用逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法 ,检测正常非孕妇女和原因不明习惯性流产 (ＵＨＡ)患者主动免疫前后外周血单个核细胞中Ｔ辅助细胞 (ＴＨ) 1型的细胞因子白细胞介素 (ＩＬ) 2、γ干扰素和ＴＨ2型的细胞因子ＩＬ 10的ｍＲＮＡ的表达水平 ,探讨主动免疫治疗对ＵＨＡ患者体内ＴＨ1、ＴＨ2型细胞因子平衡的影响。一、资料与方法1 研究对象 :选择 1999年 3月至 2 0 0 0年 7月就诊于我院门诊的患者共 6 0例 ,分为 2组 :(1)ＵＨＡ组 30例 ,平均年龄 (31± 5 )岁 ,自然流产次数≥ 3次 ,按我院常规进行病因筛查[1] ,均行主动免疫治…     

用猴的类DPB基因诱导的PCR指纹图对HLA-DP基因快速相容性测定

目的 将PCR指纹图用于个体间HLA－DP的基因水平交叉配型，确定供－受体间DPB基因的相容性。方法 引入猴的类DPB等位基因的扩增产物作通用性异源双链生成物（UHG），使原不有产生POCR指纹图的DPB基因扩增产物在非变性PAGE中显示特定的“卫星条带”，从而可用于供受体间HLA－DP基因的相容性测定。结果 11株和HLA纯合的B淋巴细胞系和随机个体进行PCR－DPB指纹图及交叉配型分析，能敏感地反映了个体间DP基因的差异，特别是在纯合子DPB＊0201和杂合子DPB＊0402／0501中初步发现了可能存在着未能被PCR－RFLP区分的新的亚型或新的等位基因，但是尚不能区分DPB＊0201和DPB＊0402两个等位基因，有待今后进一步探索。结论 初步表明该技术可有效判别供－受体DBP基因匹配性，并有简单、快速等优点。     

p53基因突变及染色体倍性与大肠癌转移之间关系初探

目的研究大肠癌转移与ｐ５３基因突变及染色体倍性之间的关系。方法采用特异合成引物对ｐ５３基因的有关外显子进行ＰＣＲ扩增，结合单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和银染技术，检测１５例大肠癌手术标本ｐ５３基因的突变；使用流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析其染色体的倍性。结果８例有转移灶大肠癌病人中７例表现有ｐ５３基因的突变，而７例未转移大肠癌病人只显示３例有ｐ５３基因的突变。异倍体的９例病人中７例有ｐ５３基因突变，二倍体的６例病人中有３例有ｐ５３基因突变。结论大肠癌转移与ｐ５３基因突变细胞染色体异倍性三者相互存在着密切联系     

粘附分子CE44v6表达和p53基因突变与卵巢癌转移关系的研究

目的 探索卵巢癌粘附分子ＣＤ４４和变构体ＣＤ４４ｖ６表达和Ｐ５３基因突变与卵巢癌转移之间的关系和作用柚是。方法 选择正常卵巢２０例,良性卵巢肿瘤２０例、卵巢癌４５例（其中２０例肿瘤无转移,２５例肿瘤有转移）,应用流式细胞仪测定卵巢癌细胞ＤＮＡ含量及其在细胞周期各相中的分布;应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及特异探针Ｄ３对卵巢癌细胞进行ＤＮＡ印溃杂交分析,并对杂交条带进行辉度扫描;应用银染聚     

青霉素酶酶电极

以尼龙网为载体用交联白蛋白法制备青霉素酶酶膜,白蛋白浓度为40%,戊二醛浓度为1%,酶总活力为207.3U.与玻璃电极组装成酶电极,其测试适宜温度和PH分别为37℃和7.在0.025M磷酸缓冲液反应系统中苄青霉素的线性范围为0～15mM,△pH/mM为0.095.苄青霉素浓度为1.25mM时,其响应时间和平衡时间分别为1.5和10分钟.电极的储藏稳定性和测试重演性分别为45天和60次.电极的热稳定性较差,55℃保温40分响应位降低20.6%.青霉素酶酶电极可用于测定苄青霉素和青霉素V纯品,适用于针剂车间的抽样试验,亦可作为青霉素发酵在线控制测定苄青霉素效价方法.根据实验结果作者进行了理论探讨.