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目的克隆并体外表达HPV58E6,为E6致癌作用和疫苗的研究奠定基础.方法通过PCR方法从HPV58全基因克隆中扩增出HPV58E6基因片段,利用基因重组技术,将其克隆至真核表达质粒pcDNA3的T7启动子下游,体外转录成mRNA后,在源自网织红细胞的翻译缓冲液中表达生物素标记的HPV58E6蛋白,化学发光法检测,X光胶片曝光显影鉴定.结果酶切电泳证实质粒构建正确,SDS-PAGE电泳显示在相当于HPV58E6分子量约18.8kD的位置出现条带,X光胶片亦在相应位置出现印迹条带.结论成功表达了含有生物素标记的HPV58E6蛋白,为其致癌作用和治疗的研究奠定基础. 相似文献
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目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化的作用机制。方法:用HCMV感染HUVEC,采用RT PCR方法检测不同感染时段细胞RAGEmRNA的表达。结果:HCMV感染HUVEC后,0?h时RAGEmRNA有基础水平的表达,4?h开始升高,8?h时表达水平明显升高,随感染时间延长,表达量逐渐增高,感染24?h时达高峰,48?h开始回落,72?h表达量仍维持在较高的水平,显著高于0?h。各时段与0?h比较,均有统计学意义(P<0.01)。结论:HCMV感染人脐静脉内皮细胞后能够促进RAGE mRNA的表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调RAGE介导内皮细胞的炎症反应,促进动脉粥样硬化的发生、发展。 相似文献
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为提高医学微生物学实验教学质量,激发学生学习兴趣、培养科学思维、掌握实验操作技能,进行了一些改革和探索。文章从整合实验教学内容,开发综合性试验;引入设计性实验教学法,发挥学生主观能动性;加强实验室建设,重视生物安全方面以及改进实验教学手段,增添实验内容等方面进行了阐述。 相似文献
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HPV16 L1-E7蛋白疫苗诱导小鼠产生抗体及细胞免疫应答的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨嵌合性病毒样颗粒HPV16 L1-E7蛋白疫苗接种于动物体内诱发体液和细胞免疫反应的能力。方法:以本室构建的HPV16 L1-E7嵌合蛋白疫苗腹腔注射免疫BALB/c小鼠,在初次免疫后,分别于第3,4,5周采血ELISA检测特异性抗体的产生。并耳皮下注射HPV16L1蛋白,检测特异性DHT反应,在末次免疫2周后,取小鼠脾细胞,用HPV 16 L1-E7蛋白刺激,检测T细胞增殖反应及血清IFN-γ水平。结果:HPV16 L1-E7蛋白疫苗免疫小鼠可有效产生HPV16 L1抗体及特异性DTH反应,加强免疫后,抗体水平升高,两者水平均高于对照组(P<0.01),HPV16 L1-E7嵌合蛋白疫苗免疫后取小鼠脾细胞,在特异性HPV16 L1-E7蛋白抗原刺激下,特异性T淋巴细胞明显增殖,被免疫小鼠血清中出现高水平IFN-γ。结论:嵌合母亲产颗粒HPV16 L1-E7蛋白可诱导小鼠产生高滴度抗体,HPV16L1特异性TDH参与的超敏反应及细胞免疫应答的细胞因子,这为研究预防HPV感染和治疗HPV相关性肿瘤的疫苗提供了实验资料。 相似文献
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应用地高辛非放射性标记与检测系统制备人乳头瘤病毒16型E6(HPV16E6)转化基因DNA探针,经用斑点杂交检测,探针特异性强,灵敏度达0.1pg,应用组织切片原位杂交技术检测了44例子宫颈癌组织。结果表明,HPV16E6阳性27例、占61.36%,5例正常对照子宫颈组织中未检出。提示HPV16E6转化基因与子宫颈癌密切相关,为阐明子宫颈癌的病因和HPV16E6在诊治子宫颈癌中的作用提供了理论依据。 相似文献
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优化密码促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨优化密码对人乳头瘤病毒6b型(HPV 6b)基因表达及免疫原性的影响,为治疗性DNA疫苗的研究奠定基础。方法:设计合成含优化密码及pRB结合位点突变的HPV 6bE7(humE7)全长基因。测序验证无误后,定向克隆于pcDNA3的Kpn I和EcoR I位点,成功构建真核表达质粒pcDNA3-hu-mE7。体外转染COS-1细胞,免疫荧光检测其E7蛋白表达。C57BL/6小鼠胫前肌内接种裸DNA,观察其诱导的细胞免疫反应。结果:pcDNA3-hu-mE7在COS-1细胞获得明显表达,表达产物主要位于细胞核中。DNA免疫结果显示,与含有野生型E7基因的表达质粒pcDNA3-wtE7比较,pcDNA3-hu-mE7免疫小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ产生明显升高,CD8^ 和CD4^ 淋巴细胞活性增强。结论:优化密码能促进HPV 6b E7蛋白表达及DNA疫苗诱导的细胞免疫反应。 相似文献
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E型沙眼衣原体MOMP基因重组质粒的构建与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:构建E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)基因重组真核表达质粒pVAX1-MOMP,为探索安全的E型CtDNA疫苗奠定基础。方法:根据Genebank中E型Ct MOMP基因序列设计引物,用高保真PCR方法从E型Ct基因组DNA中扩增得到约1.1kb的MOMP片段,克隆至pcDNAⅡ载体,测序后亚克隆至表达载体pVAX1,构建卡那霉素抗性真核重组表达质粒pVAX1-MOMP,并以重组质粒转染COS-1细胞进行表达,用Western blotting方法鉴定表达产物。结果:从E型Ct基因组DNA中扩增出特异的MOMP基因片段,酶切鉴定及DNA序列测定证实pVAX1-MOMP重组质粒构建正确,能在COS-1细胞内表达,表达产物能与抗MOMP单克隆抗体特异性结合。结论:成功构建E型沙眼衣原体MOMP真核表达质粒pVAX1-MOMP,并在真核细胞内获得表达。 相似文献