由脐血单个核细胞和富集的CD34+细胞扩增的造血干/祖细胞的生理功能比较

目的 探讨由脐血单个核细胞(MNC)和富集的CD34+细胞起始扩增所得的造血干/祖细胞在体内植入及造血重建的能力.方法 从人脐血中分离出MNC和CD34+细胞,在体外扩增7 d.将非肥胖糖尿病型重症联合免疫缺陷型(NOD/SCID)小鼠分为四组,在接受亚致死剂量铯源照射后,进行细胞移植,实验A组接受由MNC培养得到的CD34+细胞和CD34-细胞;实验B组接受由富集的CD34+细胞培养得到的CD34+细胞和CD34-细胞;阳性对照组接受从脐血新鲜分离的CD34+细胞和CD34-细胞;阴性对照组不接受细胞移植,仅输注相同体积的IMDM培养基.6周后处死存活的小鼠,取其骨髓、脾脏和外周血细胞,分别进行细胞表型分析、集落和人特异性基因的检测.结果 经过体外扩增,以富集的CD34+细胞起始培养者的细胞总扩增倍数为39.8倍,远高于以MNC为起始细胞者的1.88倍.移植6周后,所有接受细胞移植的小鼠均存活,存活小鼠的骨髓和脾脏细胞中均能检测到人源细胞(CD45+细胞)及人源的各系血细胞,实验A组各类细胞的含量稍高于实验B组,且接受细胞移植小鼠的骨髓和脾脏细胞中可检测出人特异的Alu序列.结论 与从脐血中新鲜分离的细胞相比,扩增后的造血干/祖细胞的体内植入能力有所下降,以MNC起始扩增的造血干/祖细胞体内植入能力优于以富集的CD34+细胞起始扩增者,但二者体内造血重建能力的差异不显著.     

精液细胞DNA倍体分析结合生精细胞检查鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症

目的：拟通过比较梗阻（OA）和非梗阻性无精子（NOA）症患者精液细胞DNA倍体分析与细胞学检查结果的特点,以期建立一种无创的诊疗方案以鉴别OA与NOA。方法：NOA患者20例和OA患者10例,按照WHO方法进行精液分析诊断,获取其精液标本,液化后离心取沉淀物,1份采用体积分数70％冰乙醇重悬精液沉淀,4~C固定后用PI染色,采用流式细胞仪进行DNA倍体分析。同时,取另1份精液沉淀涂片,进行Diff-Quick染色和免疫细胞化学染色。结果：DNA倍体分析结果表明,20例NOA患者精液中均存在单倍体（1Y）、二倍体（2N）和四倍体（4N）细胞,其中2N细胞含量最高,约占71．25±8．73％。1N细胞的百分比含量为5．46±2．93％,4N细胞含量为3．28±2．54％。10例OA患者精液中有8例只存在2N细胞,含量为71．67±13．09％,未检测到1N和4N,2例未检测到各种倍体细胞。精液细胞学检查结果表明,20例NOA患者中有15例患者精液中可检测出生精细胞,5例患者精液中未检出生精细胞。10例OA患者精液中均未检出生精细胞,其中2例没有任何细胞。结论：精液细胞DNA倍体分析与细胞学检查作为2种无创的检查方法,均可作为评估患者生精功能的辅助诊疗手段,两者结合可作为鉴别OA和NOA的辅助诊断指标。     

天麻的真伪鉴别

天麻由于药材名贵,市场上伪品较多,本文从天麻与伪品大理菊,紫茉莉,马铃薯性状特征,显微特征,理化特征的不同点来鉴别正品与伪品的不同,以供同仁参考。     

半夏的真伪鉴别

半夏与水半夏虽然同属天南星科植物,但药用价值相差甚大。如何准确鉴别显得十分必要。本文从半夏与水半夏的性状特征,显微特征,簿层层析等多方面进行比较,从而得出准确全面的鉴别方法,以供同行参考。     

非梗阻性无精子症三步法取精术及其临床意义(附73例报告)

目的:探讨非梗阻性无精子症应用三步法取精术获取睾丸精子的方法及其临床意义。方法:73例非梗阻性无精子症患者按步骤依次行睾丸细针抽吸术、睾丸活检术、睾丸显微取精术,并将每次获取的睾丸组织在倒置显微镜(×400)下寻找精子,如该步操作查见精子则终止手术,若未查找到则依次进行。同时取睾丸组织送病理行组织学检查。结果:73例患者行睾丸细针抽吸术,28例(38.4%)获得精子;行至睾丸活检术时,38例(52.1%)获得精子;行至睾丸显微取精术时,47例(64.4%)获得精子。病理学检查结果为唯支持细胞综合征型25例,其中10例查到精子,精子成熟阻滞型21例,其中14例查找到精子,精子发生低下型27例,其中23例查到精子。结论:三步法取精术能够有效地提高患者精子获得率;其精子获得率与睾丸组织学类型相关,其中精子发生低下型精子获得率较高。     

人精原干细胞分离、培养与鉴定

目的 :分离、鉴定和培养人精原干细胞(SSC),以获得纯化、富集的人SSC并为其研究与应用奠定基础。方法:通过免疫荧光方法检测睾丸组织中CD90表达情况;应用两步酶消化和差速贴壁法分离人睾丸生精细胞,以CD90为人SSC标志,用免疫磁珠分选技术(MACS)对人睾丸生精细胞进行分选,并利用RT-PCR和免疫细胞化学对分选所得CD90+细胞进行鉴定;同时用SG培养液将CD90+细胞与支持细胞进行体外共培养。结果:MACS分选所得CD90+细胞大小、形态特征较为均一,RT-PCR检测其表达人SSC标记性基因,免疫荧光检测其高表达人SSC特异标记GFRA-1、GPR125和UCHL-1,阳性率达90.5%,其在SG培养液中与支持细胞共培养14 d后仍可保持良好活性。结论:CD90可作为人SSC特异性标志之一,结合差速贴壁和MACS可高效分选人SSC,分选所得SSC可在SG培养液中进行体外培养。     

反转录病毒载体介导Indian hedgehog信号蛋白在C3H10T1/2细胞中的表达及成骨诱导潜能

背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染C3H10T1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率。运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察C3H10T1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性。结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在C3H10T1/2中呈显著共表达。在体外培养过程中,Ihh能诱导C3H10T1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导C3H10T1/2细胞向骨细胞分化的潜能。     

李氏砭法虎符铜砭刮痧在糖尿病足中的应用体会

糖尿病足是糖尿病的慢性并发症之一,中医属于“脱疽”,因脾气不健,肾阳不足,外寒入侵,瘀血内停所致,治疗主要以温阳散寒、活血通络、补益脾肾为主。李氏砭法虎符铜砭刮痧的辨证思路,以通论、整体论、肝胆论、脊柱中心错位疾病理论、生物全息胚论、谿谷论、徐而和论、四井排毒论构成完整理论体系,独创虎符铜砭刮痧技术,治愈许多疑难杂症。笔者从中医角度阐述了李氏砭法以“通论”和“整体论”为核心,用刮痧行气活血方法治疗糖尿病足的心得体会。     

培养前后脐血CD34~＋细胞在NOD/SCID鼠体内造血重建功能的比较

目的:以NOD/SCID小鼠为模型, 经半致死剂量照射后输注新鲜或培养后的造血细胞, 以比较培养前后脐血CD34 细胞的造血重建功能.方法:从新鲜脐血中分离单个核细胞(MNC), 采用干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、Flt3配体(FL)、白细胞介素3(IL-3)和白细胞介素6(IL-6)细胞因子组合体外培养14 d.通过MiniMACS免疫磁性吸附柱从新鲜或培养后的MNC中分离CD34 细胞, 4×105个CD34 细胞和5×106CD34-细胞混合后通过尾静脉输注入NOD/SCID小鼠中.饲养过程中动态观察外周血象恢复情况, 6周后检测小鼠骨髓和脾脏细胞中人源细胞及各系造血细胞的含量.结果:体外培养MNC 14 d后, 总细胞扩增了1.78倍;细胞移植6周后, 输注新鲜和培养后造血细胞的小鼠均存活, 在小鼠骨髓和脾脏中均可检测到人源细胞及各系人源血细胞和人特异ALU基因序列, 小鼠外周血象恢复到辐照前水平.培养后CD34 细胞在小鼠体内的植入水平与新鲜CD34 细胞的相近, 而其各系人源血细胞的含量高于新鲜CD34 细胞. 结论:体外培养14 d后的CD34 细胞仍保持了体内植入和重建造血的能力, 且其多系造血重建能力优于新鲜CD34 细胞.