含编码人精子膜多肽cDNA和乙肝表面抗原基因的重组痘苗病毒

合成编码一种人精子膜蛋白YWK-Ⅱ胞外区的一段多肽片段的双链寡核苷酸链,HSD-2a.将HSD-2a和3’端乙肝表面抗原主S基因连接并与pUC18质粒重组.经鉴定的重组质粒用BamH Ⅰ和EcoRl酶切后,可分离纯化得到HSD-2a和HBsAg的主S基因连接片段,将该连接片段插入痘苗病毒通用表达载体pGJP-5的痘苗病毒启动子P_(7.5)下游,构建成重组质粒pGJP-HSD/HBs.将该重组质粒传染已感染了天坛痘苗病毒的猴肾细胞CV-1,pGJP-5中含有的TK基因与出发株病毒基因组的TK基因发生体内同源重组,构成重组痘苗病毒vv-HSD/HBs.HuTK~-细胞经vv-HSD/HBs感染后,在5-溴脱氧尿苷存在下进行空斑分析,筛选出TK~-重组病毒.应用ELISA方法对已感染了重组病毒的HuTK~-细胞培养上清和细胞裂解液测定,表明有HSD-2a编码的多肽片段的表达.Western-blot法分析呈现28和30Kd两条显色带.重组痘苗病毒vv-HSD/HBs有可能作为抗生育疫苗用途.     

基因工程肝炎疫苗研究新进展

病毒性肝炎是世界性的严重传染病。肝炎病毒至少有五种,甲型肝炎病毒(HAV),乙型肝炎病毒(HBV),丙型肝炎病毒(HCV),丁型肝炎病毒(HDV),戊型肝炎病毒(HEV)。HBV是一DNA病毒属嗜肝DNA病毒科。HDV是依赖于HBV的缺陷型病毒,其基因组是一单链RNA环状分子,包膜是HBV的包膜抗原。HAV、HCV、HEV均为RNA病毒,     

丙型肝炎病毒C33c抗原基因的融合表达及初步应用

我们采用融合表达的方式对Ｃ３３Ｃ基因进行克隆和表达研究、表达产物用于临床标本的检测,并与ＩＮＮＯ－ＬＩＡ试剂盒检测结果作比较。１．资料：（１）血清标本：瑞金医院临床病毒研究室保存的丙型肝炎（丙肝）患者血清。（２）菌株和质粒：大肠杆菌８Ｌ２１（ＤＥ３）及表达载体ＰＧＥＸ－３Ｘ（４．９５ｋｂ）由中国科学院上海生物化学研究所提供。含Ｃ３３ｃ基因片断的质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ／Ｃ３３ｃ由瑞金医院临床病毒研究室提供。（３）酶及化学试剂：ＤＮＡ限制内切酶、Ｔ４连接酶、Ｋｌｅｎｏｗ酶均为Ｐｒｏｍｅｇａ…     

乙肝病毒核心抗原DNA疫苗诱导小鼠抗原特异性CD8+T细胞动态变化和动态分布

目的：研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)DNA疫苗诱导的细胞免疫应答。方法：用表达乙肝病毒核心抗原N端144个氨基酸的重组质粒DNA(简称pHBc144)100ug免疫C57BL／6小鼠，用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠体内抗原特异性CD8^ T细胞的动态变化。结果：pHBc144免疫后抗原特异性CD8^ T细胞逐渐增多，在初次免疫的第14天出现第一个免疫应答高峰，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降进入免疫记忆期并在1年内维持在稳定水平。加强免疫后在第10天抗原特异性CD8^ T细胞数量达到高峰，约是初次免疫应答高峰的2倍，此后抗原特异性CD8^ T细胞数量逐渐下降，但下降的速度比初次免疫应答减缓。结论：pHBc144DNA疫苗可诱导有效的细胞免疫应答。     

The Expression of Sperm Membrane Peptide-Hepatitis B Surface Antigen Fusion Protein with Recombinant Vaccinia Virus

A synthetic oligonucleotide, HSD-2a, encoding a peptide segment of the extracellular domain of a human sperm membrane protein, YWK-Ⅱ, was fused with hepatitis B surface antigen gene (HBs gene). The fused gene was then cloned to pUC18 plasmid.