人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X的纯化和它的免疫性质

乳酸脱氢酶(LDH)及其同工酶(1～5),广泛存在于哺乳动物各类组织细胞中。1963年Blanco等和Goldberg等首先在人精液中发现了LDH-X。Glement证实LDH-X仅存在于睾丸的初级精母细胞、精子细胞、精子和精液中,并以精子中的含量最高(约占总量的80～90％),在精子中含量高的事实,提示LDH-X的存在可能与精子的能量代谢有关。近年来,注意到抗LDH-X的血清能抑制豚鼠精     

人睾丸乳酸脱氢酶同工酶-X(LDH-X)的提纯及人与牛睾丸LDH-X免疫性质的比较

以人睾丸为材料,经过分步硫酸铵沉淀和DEAE-纤维素柱层析,将睾丸匀浆中LDH-X的比活性由1.4单位/毫克蛋白质提高到75.0单位/毫克蛋白质。纯化的LDH-X在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈一条酶带,位置在LDH-3和LDH-4区带之间。用提纯的LDH-X制备了兔抗人LDH-X抗血清,又经免疫琼脂双向扩散法鉴定提纯的酶,结果显示为单一的沉淀线。以上结果还证明,纯化的LDH-X是比较均一的。我们还发现,兔抗人LDH-X抗血清与人LDH-1～5无免疫交叉,证明LDH-X与LDH的其他同工酶的免疫决定簇不同。在兔抗人LDH-X抗血清与牛LDH-X之间,以及在兔抗牛LDH-X抗血清与人LDH-X之间也均无免疫沉淀线,说明LDH-X具有较强的种属特异性。     

同工酶的鉴定

通常将能催化同一化学反应但分子结构或理化特性不同的酶称之为“同工酶”。1959年Markert和Moller用电泳法分离乳酸脱氢酶(LDH),发现了LDH存在着多种分子形式,并提出用同工酶(Isozyme)这个术语来命名。至今发现的同工酶已不下500种。同工酶可来源于不同个体、器官和组织,也可来源于同一细胞的不同亚细胞结构。因此,如何分离与鉴别组织中存在的同工酶,是同工酶研究中首先要解决的问题。本文将就这方面的研究以及一些常用的方法作简略的介绍。