不同类型的转基因细胞核供体对生产小鼠转基因克隆胚胎的影响

目的 利用体细胞核移植(SCNT)技术生产小鼠转基因克隆胚胎. 方法 利用所构建的含新霉素抗性(Neor)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体, 通过电穿孔的方法, 分别转染小鼠胎儿成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞,经G418筛选14d后用于核移植.同时以未转基因小鼠卵丘细胞和成纤维细胞为核供体,进行体细胞核移植. 结果 转基因与未转基因胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(154/160)发育率为19.23%和22.91%,差异不显著(P＞0.05);转基因胚胎干细胞与胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(152/154)发育率为41.54%和19.23%,差异显著(P＜0.05);未转基因卵丘细胞与成纤维细胞的重构胚的囊胚(171/160)发育率为41.17%和22.91%,差异显著(P＜0.05). 结论 利用体细胞核移植技术,小鼠胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞可以有效地生产小鼠转基因囊胚.     

NuMA和γ-tubulin在核移植克隆胚胎中的动态变化和作用

核有丝分裂器蛋白(NuMA)和γ-微管蛋白(γ-tubulin)在卵母细胞成熟、受精和核移植胚胎早期发育过程中起重要作用。供体细胞γ-tubulin和NuMA参与了核移植克隆胚有丝分裂纺锤体的组装,NuMA主要参与了纺锤体极的装配和维持,而供体中心体调节核移植胚最初纺锤体的形成。核移植重构胚中心体结构异常经常伴随染色体异常排列、纺锤体结构异常,而中心体分布异常经常伴随异常卵裂。     

卵巢高钙血症型小细胞癌的研究进展

卵巢高钙血症型小细胞癌（small cell carcinoma of the ovary-hypercalcemic type,SCCOHT）是一类原发于卵巢的高度恶性、预后极差的罕见妇科肿瘤,常见于年轻女性。尽管该肿瘤的确切起源目前尚不明确,组织形态学上也与其他发生于卵巢的小细胞肿瘤较难鉴别,由于其临床罕见性,目前也没有明确的治疗方案指南,但是近年其分子发病机制方面有了一些突破性的研究进展。SCCOHT的基因组为二倍体,以SMARCA4的突变和SMARCA2的表达缺失为特征。免疫组织化学染色中两者所编码的BRG1和BRM蛋白表达的缺失成为了病理诊断中鉴别该肿瘤的重要手段。此外还出现了一些针对致病分子的靶向药物等治疗方案的研究。现主要对该肿瘤的临床病理特征、鉴别诊断、发病机制及治疗等方面的研究进展进行分析总结,以期进一步加深对该类病变的认识,为更加精准的诊断治疗奠定基础。     

绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及向神经细胞的分化

目的 建立能够稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠胚胎干细胞(ESC),并诱导其向神经细胞分化,为临床移植治疗神经系统疾病提供方便追踪观察的神经细胞.方法 分别用脂质体、电穿孔转染法转染小鼠胚胎干细胞系R1,检测48 h转染效率;经G418筛选后,得到稳定高效表达GFP的ESC克隆,通过碱性磷酸酶(AKP)染色检测ESC的生物学特性;利用单层分化法诱导转染GFP的胚胎干细胞向神经细胞分化,通过免疫荧光检测神经细胞特异标记Toil.结果 转染48 h的GFP阳性细胞转染率脂质体组为65%,电穿孔组为79%,两组比较差异无统计学意义(X2=3.14,P0.05).转染GFP的胚胎干细胞AKP染色阳性,并可诱导分化为Tuj1阳性的神经细胞.结论 建立稳定表达GFP基因的胚胎干细胞克隆,获得的转染GFP的胚胎干细胞能够分化为神经细胞.     

炎症细胞因子与胚胎停育的关系

胚胎停育是指因受精卵缺陷或母体存在不利于妊娠因素而导致妊娠早期胚胎死亡而停止继续发育的现象,是一种常见的早期病理性妊娠。其发病率逐年增加,已成为最常见的妊娠并发症,最终可导致自然流产、稽留流产的发生。胚胎停育发生与许多因素有关,其中约半数与免疫因素有关。细胞因子是一类能调节免疫反应的生物活性分子,其中与炎症有关的称为炎症细胞因子。子宫蜕膜、滋养层细胞可以分泌多种炎症细胞因子。近年研究表明,在胚胎发育过程中多种炎症细胞因子之间相互协同、依赖又相互拮抗构成细胞因子网络,参与母胎界面免疫应答,使其导致胚胎停育的确切机制及信号通路错综复杂。综述炎症细胞因子与胚胎停育的关系及相关机制,以期为胚胎停育的预防和开发靶向治疗药物奠定理论基础。     

卵巢癌起源及发病机制研究的最新进展

卵巢癌起源及发病机制的研究近年来出现了很多新的理论,包括卵巢癌不是一个单独的疾病,而是可以根据形态学和分子遗传学差异进行两级分类的一组疾病。卵巢癌均起源于卵巢外,其中浆液性癌来源于输卵管伞,子宫内膜样和透明细胞癌来源于经输卵管逆流的子宫内膜形成的异位病灶,粘液性和Brenner瘤起源于输卵管与卵巢间皮之间的Walthard细胞巢。本文就对此取得的一些最新的研究进展进行综述报道。     

F9细胞的培养和全细胞抽提物获取方法的比较

目的对F9小鼠畸胎瘤细胞进行培养,探索理想的获取全细胞抽提物的方法。方法应用蛋白质抽提试剂盒、反复冻融循环和超声波裂解法进行F9全细胞抽提物的获取。结果通过蛋白质抽提试剂盒和反复细胞冻融循环的方法所获取的细胞抽提物渗透压和浓度偏低,而选用超声波裂解法所获取的细胞抽提物,无论从pH,渗透压,还是蛋白浓度方面分析均与理想值接近。结论选择超声波裂解法作为获取F9小鼠畸胎瘤全细胞抽提物的理想方法 。     

胚胎干细胞与四倍体互补产生转基因小鼠

目的 将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合，构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs)，获得小概率的同源重组事件，进而直接得到所要的突变品系。 方法 通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达质粒转入ESCs，用G418筛选获得EGFP-ESCs。另外，通过电融合获得四倍体囊胚细胞，显微注射法将19～21个EGFP-ESCs注入每个四倍体囊胚腔，分别移植到假孕2.5d雌鼠子宫或假孕0.5d的输卵管内。 结果 获得稳定表达的EGFP-ESCs，染色体数目正常 (2n＝40条)；四倍体细胞融合率为95.07%，囊胚发育率为95%；共获得410个重构囊胚；移植后未得到出生小鼠，但共观察到了151个着床位点，子宫移植的着床率为29.41%，输卵管移植的着床率为64.37%，获得的胚胎中EGFP蛋白有散在的表达。 结论 稳定表达的EGFP-ESCs参与到了转基因胎鼠的发育中；本实验中输卵管移植的着床率高于子宫移植的着床率。     

小鼠胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞转绿色荧光蛋白基因的研究

目的检测用增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）转染的小鼠胎儿成纤维细胞及小鼠胚胎干细胞的转染效率及EGFP的表达情况。方法电穿孔法将EGFP转入胎儿成纤维细胞及胚胎干细胞，G418筛选，荧光显微镜观察转染效率及绿色荧光蛋白表达情况。结果胚胎干细胞的转染率高于成纤维细胞，转染后的两种细胞经药物筛选均有绿色荧光蛋白表达。结论电穿孔转染细胞的方法简单、效率高，是一种较为理想的基因转染方法，经药物筛选后的两种细胞均可用于核移植，为转基因克隆动物的研究奠定了基础。