小鼠精原细胞的分离和纯化

目的　探讨小鼠精原细胞的分离纯化。　方法　用组合酶消化法制备 7～ 8d小鼠的生殖细胞悬液 ;用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞。　结果　所获细胞悬液内活细胞、死细胞及细胞团的百分比分别为90 .0 8%、9.92 %及 8.91% ;平均每个睾丸可获得 4.136× 10 5 个细胞 ;精原细胞主要分布于位于 2 7%～ 35 %间的Percoll梯度中 ,其超微结构与 7～ 8d小鼠睾丸切片内精原细胞的超微结构一致 ,经纯化后其纯度达 6 8.76 %。　结论　用组合酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的 7～ 8d小鼠的精原细胞能满足体外培养的需要     

角质形成细胞的培养及其表皮生长因子受体表达

目的:在成功分离人皮肤角质形成细胞的基础上,观察表皮生长因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达情况。方法:实验于2006-3/10在北京大学深圳医院中心实验室进行。采用dispase Ⅱ-trypsin两步消化法获取表皮基底层细胞,用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液进行培养。小鼠皮肤成纤维母细胞的预处理:向对数生长期的小鼠皮肤成纤维母细胞培养液中加入丝裂霉素C至终浓度为4mg/L,37℃下培养4h,弃去培养液,用D-Hank’s液洗3次,加入浓度为0.25g/L的胰蛋白酶消化,分离出细胞,离心(200g,5min),用黄素腺嘌呤二核苷酸培养液悬浮细胞,计数,以5.0×104/cm2的密度种于培养皿内,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。角质形成细胞的培养:将分离的角质形成细胞悬浮在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中,以2.0×104/cm2的密度接种在前1天经丝裂霉素C处理的小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层上,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。24h换液,以后每3d换1次液。采用免疫细胞化学的方法检测表皮生长因子受体的表达,采用复合逆转录聚合酶链反应检测角质形成细胞中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果:采用dispaseⅡ消化法分离了真皮和表皮,获得较多的角质形成细胞,可以避免真皮成纤维细胞的污染。人皮肤角质形成细胞在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中培养5d可见明显的集落,约10d可长满单层。免疫细胞化学显示表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,复合逆转录聚合酶链反应显示表皮生长因子受体mRNA有明显的表达。结论:用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液可以较好地培养原代人皮肤角质形成细胞,表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,这些结果为与表皮生长因子受体相关的皮肤病(如银屑病)的研究奠定了基础。     

体外定向诱导鹿茸间充质干细胞向软骨细胞的分化

目的：间充质干细胞的诱导分化的研究多见于骨髓、脐血等组织，而在鹿茸组织中分离的间充质干细胞是否能诱导为软骨细胞目前尚不清楚。实验拟建立梅花鹿鹿茸生长中心间充质干细胞体外培养方法，观察转化生长因子β1体外诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞的可行性。 方法：实验于2006—03／2007—06在吉林大学畜牧兽医学院基础兽医研究室完成。①实验材料：4岁龄健康雄性梅花鹿由中国农科院左家特产研究所提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：于生长早期锯取梅花鹿鹿茸，在解剖显微镜下定位和切取间质层（突起部），即为鹿茸间充质干细胞所在的组织层。Ⅰ型胶原酶消化法原代分离培养鹿茸生长中心间充质干细胞，锥虫蓝染色显示细胞活性达90％以上，将活性确定后的细胞液氮冻存。取第3代细胞，用含10％胎牛血清以及10μg／L转化生长因子β1的条件培养基诱导培养。③实验评估：培养12d后于倒置显微镜下观察细胞形态，采用细胞化学及免疫细胞化学鉴定细胞。 结果：①鹿茸生长中心间充质干细胞的分离与培养：Ⅰ型胶原酶消化法培养可以获得均一的间充质干细胞，贴壁的间充质干细胞形态均匀，呈长梭形，克隆样生长，增殖迅速。②转化生长因子β1体外定向诱导鹿茸间充质细胞分化为软骨细胞：转化生长因子β1诱导分化的鹿茸间充质细胞生长迅速，诱导后细胞形态明显改变，呈典型的软骨细胞形态，甲苯胺蓝染色阳性，Ⅱ型胶原表达阳性。 结论：采用酶消化法可以从鹿茸生长中心间充质层中分离出间充质干细胞，在体外转化生长因子β1具有促进鹿茸生长中心间充质干细胞分化为软骨细胞的能力。     

基因打靶技术及其在哺乳动物生殖过程研究中的应用

在过去十几年里，分子生物学技术与哺乳动物胚胎操作技术的结合，为生物学的研究开辟了一个崭新的研究领域。通过基因操作技术，一个动物的某一基因可以被分离、扩增和修饰，并可将它转移到另一个同种或不同种的动物体内。利用目前常用的几种基因转移技术，如DNA显微注射、电击成孔导入、DNA-磷酸钙共沉淀、精子载体及逆转录病毒感染等方法，已能有效地将外源基因导入靶细胞内。这些导入的外源基因在靶细胞基因组中整合的位点一般是随机的，这种随机整合有可能导致下面几种情况的出现，如导入的外源基因整合于某一正常基因内导致宿主细胞…     

白血病抑制因子及其受体与哺乳动物的胚胎发育和着床

在哺乳动物胚胎发育过程中,细胞与细胞间的相互作用是调节细胞分化、形态发生和生长发育的主要机制,这些相互作用通常是由神经内分泌激素和一些多肽类生长因子及其受体等所介导的。白血病抑制因子（Leukemiainhibitoryfactor,LIF）是一种多功能的细胞因子,因它能抑制?..     

体外培养小鼠睾丸间质细胞的形态学特征

本研究初步观察了睾丸间质细胞体外培养的形态学特征,以期为深入研究其分泌睾酮的影响因素奠定基础.方法为无菌取成年雄性昆明小白鼠的双侧睾丸,置于盛有适量PBS的培养皿中;用尖镊撕去附睾及白膜,用吸管吹打至曲细精管与间质组织分散;加入10倍体积的胶原酶,37℃下消化10～15 min后移入10 mL离心管,待曲细精管及间质组织沉降后移出上层细胞悬液;取一滴细胞悬液,加入适量台盼蓝混匀后用红细胞记数板计算细胞数目,调整细胞密度至3×105个/mL;将细胞接种在直径35 mm的塑料培养皿中,常规条件下培养;当细胞开始贴壁时,小心吸去旧液,加入新鲜培养液(D-MEM+10%小牛血清+1%双抗+1%谷氨酰胺)培养,定时观察;当培养细胞80%汇合时,弃去培养液,用PBS缓冲4%多聚甲醛室温固定1 h,PBS洗2次;用异丙醇油红法略加改进后进行脂质染色,苏木精复染;另用95%乙醇和PBS缓冲4%多聚甲醛(9∶1)室温下固定细胞40 min,PBS洗2次,1.4%甲基蓝染色后进行观察.本实验每次所获细胞悬液量均为3 mL,细胞密度为1.76×106个/mL,平均每侧睾丸可获间质细胞5.28×106个,其中活细胞、死细胞的平均百分比分别为88.94%、12.06%.在体外,间质细胞贴壁性状良好,不需特殊粘附分子.接种后一般8～10 h后即发生极化,胞质铺展,伸出突起.培养约14～15 h后即开始贴壁.镜见贴壁细胞透明,基本无颗粒,轮廊不清,增殖的细胞相互连接成单层膜状.细胞化学:甲基蓝染色显示,间质细胞核呈圆形或卵圆形,嗜碱性,位于胞质中央;核仁1～2个,清晰可见,一般位于核的边缘部;其胞质轮廊为多角形,一般有3～4个突起,遥抟中可见有多量大小不一的空泡状结构.油红O脂质染色显示,这些空泡状结构为脂质小滴,呈红色或红褐色,大小不一,圆形悬浮状存在,聚集于胞质两极或散布于核的四周.本实验结果表明,间质细胞胞质中存在大量脂滴,推测这些脂质是为其雄激素分泌功能提供必备前体物质而存在的.     

815例铜绿假单胞菌分布及药敏分析

目的:了解铜绿假单胞菌(PAE)的临床分布及药敏特性,为临床合理使用抗菌药物及控制感染提供依据。方法:对我院2010年1月~2014年12月送检样本中培养分离出铜绿假单胞菌结果进行回顾性分析。结果:共分离铜绿假单胞菌815株,占总病原菌13.5%;主要标本来源是痰标本占74.2%。铜绿假单胞菌对丁胺卡那霉素的耐药率最低为9.4%,对头孢曲松的耐药率最高为82.9%,其余抗菌药物耐药率均大于15%。结论:铜绿假单胞菌主要引起呼吸道感染,对现有多种抗生素耐药,提示临床医生对该菌须予以重视。     

厦门市思明区2019年居民健康素养监测调查分析

目的 了解思明区居民健康素养状况,分析其影响因素,为制定健康促进与教育策略提供依据.方法 采用多阶段分层随机抽样方法,抽取思明区15～69岁常住居民1 037人进行现场问卷调查.结果 2019年思明区居民健康素养具备率为38.5％(399/1 037).健康知识和理念、健康生活方式与行为、基本健康技能3方面素养具备率分...     

心理护理对顽固性高血压血液透析患者血压控制作用分析

目的 探讨顽固性高血压血液透析治疗患者实施心理护理的临床效果。方法 选取2019年1月至2021年1月本院收治的84例顽固性高血压血液透析治疗患者为研究对象,采用随机排列法分为对照组和研究组,各42例。两组均采用相同的血液透析方案治疗,在治疗期间,对照组实施常规护理,研究组在前者基础上加强心理护理,比较两组护理前后负性情绪和血压控制情况的差异。结果 两组干预前收缩压和舒张压水平对比无明显差异（P>0.05）;研究组干预后收缩压和舒张压水平均低于对照组（P<0.05）。两组干预前症状自评量表（SCL-90）评分对比无明显差异（P>0.05）;研究组干预后SCL-90评分低于对照组（P<0.05）。结论 对顽固性高血压血液透析治疗患者实施心理护理不仅可以有效稳定患者的血压水平,还可以疏导患者的负性情绪,改善其心理健康状况,临床干预效果显著。