增龄对db/db糖尿病小鼠睾丸PCNA表达的影响

增殖细胞核抗原 (PCNA) ,又称细胞周期蛋白 (cylin) ,是一种与细胞周期相关的 36 k D酸性核蛋白 ,作为 DNA聚合酶δ的一个辅助因子发挥作用 ,为 DNA 复制起始所必需。C5 7BL/Ks J- db/db小鼠是第 4号染色体恶性突变所致的一种单基因遗传自然发病糖尿病小鼠 ,是研究人类 型 (非胰岛素依赖型 )糖尿病的良好动物模型。本研究应用免疫组化方法探讨糖尿病和增龄对雄性不育 db/db小鼠睾丸组织PCNA表达的影响。实验选用 8周 ,12周 ,2 0周 ,32周糖尿病和正常小鼠 ,4%多聚甲醛经左心室灌注固定 ,取左侧睾丸 ,Bouin液后固定 ,常规石蜡包埋切…     

内皮素和一氧化氮合酶在Dahl高血压大鼠不同时期大脑皮质表达变化的研究

本研究通过观察 ET和 NOS在不同阶段 Dahl高血压大鼠大脑皮质神经组织及血管内皮细胞的分布变化 ,进一步探讨二者在高血压及其重要并发症—脑卒中发病中的意义。实验用 Dahl S和 Dahl R大鼠 ,在 5周龄投予 8%食盐饲料 ,分别在 10周、11周、12周时取材 ,4%多聚甲醛经左心室灌流固定 ,冰冻切片 ,免疫细胞化学 SP法染色 ,DAB显色。结果 :ET和 NOS免疫阳性细胞在 Dahl S和 Dahl R组大鼠大脑皮质神经元及血管内皮细胞均有分布。每年龄段Dahl S组 ET阳性细胞较同时期 Dahl R组增多 (P <0 .0 5 )。Dahl S组 NOS阳性细胞较同时期 Dah…     

db/db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax表达

目的　研究糖尿病时生殖细胞凋亡及相关基因Bcl 2和Bax表达变化。方法　以脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)检测生殖细胞的凋亡 ,免疫组化ABC法检测凋亡相关基因Bcl 2和Bax的表达变化。结果　凋亡管数及凋亡阳性率糖尿病组均较正常高 ,而且随糖尿病病程进展呈明显增加趋势 ,对照组中随加龄二者也有增加。Bcl 2蛋白以散在的颗粒状大量分布于除精原细胞的各级生精细胞中 ,且以精子细胞质为最多。随糖尿病病变加重 ,Bcl 2表达减少 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bcl 2表达率低。Bax蛋白比Bcl 2蛋白表达量少 ,以散在的颗粒状分布于曲细精管基底部的精原细胞和支持细胞中。随糖尿病病程进展和年龄增加 ,表达均呈增加趋势 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bax表达率高。结论　在db/db自发性糖尿病小鼠睾丸 ,伴随生殖细胞凋亡增加 ,Bcl 2表达减少 ,Bax表达增加 ,凋亡及相关基因在糖尿病生殖功能障碍中起重要作用     

人胰岛素样生长因子-1基因克隆及其真核表达载体的构建

目的:从胎儿肝组织中克隆人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因,并构建真核表达载体pCI-neo/hlGF-1.方法:提取胎儿肝总RNA,RT-PCR法扩增IGF-1 cDNA片段,重组于pUCM-T载体,测序正确后构建表达载体.结果:扩增得到710bp带有Kozak序列的IGF-1 cDNA片段,成功构建了真核表达载体pCI-neo/hlGF-1.结论:通过RT-PCR的方法克隆了人IGF-1 cDNA,并成功构建了真核表达载体pCI-neo/hIGF-1,为IGF-1基因治疗糖尿病创造了条件.     

肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中HO-1的表达变化

目的 :肢体缺血再灌注不仅可以引起局部组织的损伤 ,同时亦可引起远隔部位的多器官损伤 ,其中肺脏是最易受损的器官之一 ,若发生急性肺损伤 ,可导致呼吸功能不全。研究证明此种肺损伤与氧化应激有关。血红素氧化酶 (ＨＯ)是催化血红素生成胆绿素和ＣＯ的限速酶 ,诱导型血红素氧化酶 (ＨＯ - 1 )可被引起氧化性损伤的许多因素所诱生并具有保护组织免受氧化损伤的作用 ,而近来发现ＣＯ是体内重要的细胞信使。但在再灌注性肺损伤时肺组织中ＨＯ - 1的变化及作用尚不清楚。方法 :本实验采用夹闭ＳＤ大鼠腹主动脉末段造成双后肢缺血及再灌注性肺…     

胰岛素样生长因子-1工程细胞在糖尿病中的治疗作用

目的 观察胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)工程细胞移植对糖尿病模型鼠的降血糖作用.方法 将hIGF-1基因克隆入pAAV腺病毒相关病毒载体,以HEK293包装细胞及病毒颗粒,HT1080细胞检测病毒滴度.将高病毒滴度的病毒上清感染骨髓基质细胞(MSCs)并植入糖尿病模型小鼠腹腔内,观察病毒感染MSCs植入对糖尿病模型小鼠血糖的影响.结果 成功构建了hIGF-1腺病毒相关病毒载体,HEK293细胞包装得到了1012滴度的病毒上清.MSCs病毒感染率达60%.稳定表达hIGF-1的MSCs腹腔移植后,可见糖尿病小鼠的血糖明显下降(P＜0.05).结论 稳定表达hIGF-1的MSCs对糖尿病动物模型有降糖作用,说明IGF-1基因可作为糖尿病基因治疗的候选基因.     

db/db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞增殖及凋亡研究

目的　研究糖尿病对生殖细胞增殖和凋亡的影响。　方法　以免疫组织化学ABC法检测增殖细胞核抗原 (proliferationcellnucleusantigen ,PCNA)检测生殖细胞的增殖情况 ,电镜和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)检测凋亡的生殖细胞。　结果　PCNA阳性率随糖尿病病程进展 (糖尿病组 )和年龄增加 (对照组 )均呈明显下降趋势 ,但每年龄段糖尿病组PCNA阳性率均明显低于相应正常对照组。凋亡管横断面数及凋亡阳性率糖尿病组均较正常高 ,而且随糖尿病病程进展呈明显增加趋势 ,对照组中随加龄二者有增加。电镜下 ,糖尿病组小鼠睾丸精原细胞、精母细胞和精子细胞均可见到核染色质凝集、边集 ,凋亡小体形成和降解等凋亡过程。　结论　db/db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞PCNA表达减弱 ,TUNEL标记凋亡细胞增加 ,说明糖尿病使生殖细胞增殖与凋亡的平衡破坏 ,这可能是糖尿病生殖功能障碍的原因     

猴肾成纤维细胞人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因的表达和活性检测

目的:将构建的真核表达载体 pCI-neo/hIGF-Ⅰ进行表达及活性检测,为胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因治疗糖尿病奠定基础.方法:将构建的真核表达载体 pCI-neo/hlGF-Ⅰ转染猴肾成纤维细胞系 COS-7,用原位杂交和免疫细胞化学检测表达,收集培养上清以胰岛素刺激释放实验进行活性测定.结果:IGF-Ⅰ在 COS-7细胞得到了表达,并具有刺激胰岛素分泌的活性.结论:新构建的载体 pCI-neo/hIGF-Ⅰ能在 COS-7 细胞中表达、分泌,且所分泌 IGF-Ⅰ具有生物活性.     

db/db自发性糖尿病小鼠睾丸c-Fos表达变化与凋亡的关系

目的 :研究原癌基因 c-Fos在 db/ db自发性糖尿病小鼠睾丸生殖细胞分布和表达的变化。方法 :免疫组化 ABC法和细胞凋亡 TUNEL法。结果 :c-Fos免疫阳性细胞主要为精母细胞、圆形精子细胞和变形期精子 ,间质血管内皮细胞也有强阳性表达。随糖尿病病程进展 (糖尿病组 )及年龄增加 (对照组 ) ,c-Fos阳性率均呈现明显下降趋势 ,但每年龄段糖尿病组阳性率明显低于相应正常对照组。凋亡管横断面数及凋亡阳性率糖尿病组均较正常组高 ,而且随糖尿病病程进展呈明显增加趋势 ,对照组中随年龄增加二者也有增加。电镜下 ,糖尿病组小鼠睾丸精原细胞、精母细胞和精子细胞均可见到核染色质凝集、边集 ,凋亡小体形成和降解等凋亡过程。结论 :c-Fos在 db/ db自发性糖尿病小鼠睾丸表达减少 ,致使生殖细胞增殖减弱 ,凋亡增强 ,也就是增殖和凋亡的平衡被破坏 ,这可能是糖尿病生殖功能障碍的原因之一。     

大鼠肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中血红素氧合酶的表达

目的:观察大鼠肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中HO-1表达的变化。方法:采用夹闭大鼠腹主动脉下段造成双下肢缺血和再灌注性肺损伤模型,分别采集假手术组,缺血4h组及缺血4h再灌注4、8、16、24、48h组肺组织标本,以Northern印迹、Western印迹及免疫组化分析,观察HO-1表达的变化。结果:假手术组和单纯缺血组未见HO-1mRNA表达;再灌注4h可见其表达信号,且随着再灌注时间延长表达信号逐渐增强,到16h时达到高峰,之后渐减弱,48h时已消失。蛋白表达水平与mRNA表达一致。免疫组化研究显示,HO-1阳性信号主要出现在气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和肺泡巨噬细胞,而假手术组和单纯缺血组均未见阳性信号。结论:假手术及肢体的单纯缺血未诱发肺组织HO-1的表达,而肢体缺血再灌注可诱发其表达,并具有时相变化。