人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究

目的：研究人胚肺成纤维细胞(human Embryonic Lung Fibroblast，HELF)饲养层对人胚胎干细胞(Human Embryonic Stem Cells，hES细胞)生长的作用，摸索适宜的hES细胞培养与识别方法。方法：以流产胎儿肺组织制备HELF饲养层，取生殖嵴或背肠系膜及其周围组织，获得由人原始生殖细胞(human Primordial Germ Cells，hPGCs)转化成的hES细胞。比较其在不同条件下的增殖行为，并通过生物学特性鉴别该细胞系。结果：HELF饲养层在LIF存在的条件下有利于支持hES细胞的体外生长；hES细胞碱性磷酸酶组织化学染色及端粒酶ELISA检测阳性；具有正常的核型；在体外发展为类胚体。结论：HELF饲养层和LIF的协同作用能支持hES细胞的生长；建立通过生物学特性鉴别hES细胞的方法。     

原代骨髓基质细胞联合细胞因子体外诱导ES-D3细胞造血分化的研究

目的：研究原代骨髓基质细胞联合细胞因子（VEGF，SCF和TPO）体外诱导ES-D3细胞造血分化的效率，探讨体外高效诱导胚胎干细胞生成造血干／祖细胞的方法。方法：取6～8周昆明鼠骨髓制备小鼠骨髓基质细胞（BMSC）饲养层。采用二步诱导法，先将ES-D3细胞诱导分化为拟胚体（EB），再将EB置于4种体系下诱导分化造血干／祖细胞；第1组：自发分化对照组；第2组：细胞因子组（VEGF加SCF加TPO）；第3组：BMSC饲养层组；第4组：BMSC饲养层加细胞因子组（BMSC加VEGF加SCF加TPO）。诱导分化1周的部分细胞行造血祖细胞集落培养。流式细胞仪检测诱导培养7d和14d的各组细胞中干细胞特异抗原（CD34）、祖细胞特异抗原（c-kit）、粒细胞表面抗原（CD11b）、红系细胞特异抗原（Ter119）阳性表达率。间接免疫荧光染色法显示CD34、c-kit、CD11b、Te〉119阳性细胞。RT-PCR检测造血转录因子GATA-2、FIk-1、SCL、p-H1和p-major珠蛋白的表达。结果：诱导7d生成的细胞均表达造血CD34和Pkit，诱导14d生成的细胞表达单核巨噬细胞、CD11b和Te〉119，且诱导细胞表达造血转录因子（GATA-2、SCL、β-H1、β-major）基因mRNA，培养在特定条件下可形成造血祖细胞集落。从生成造血细胞和造血集落的数量分析，骨髓基质细胞饲养层与细胞因子合用时诱导效率明显高于单用组和对照组（P〈0．05或0．01）。结论：骨髓基质细胞饲养层与细胞因子合用，体外可以促进ES-D3细胞的早期造血分化，产生的造血前体细胞可进一步形成造血集落并分化成熟，表达与造血转录和早期造血分化相关的基因。     

腹腔镜下附件囊肿蒂扭转复位保守性手术的临床观察

<正>附件囊肿蒂扭转占妇科急腹症的3%,多发生于20～39岁育龄期妇女,包括卵巢囊肿蒂扭转和输卵管系膜囊肿蒂扭转等。关于其治疗,以往国内外很长一段时间内主张不复位扭转的附件,直接行患侧附件切除术,目的是避免潜在的静脉血栓栓塞发生,然而极少有血栓栓塞的报道。     

人胚骨髓基质细胞饲养层对人胚胎生殖细胞生长的作用

目的:研究人胚原代骨髓基质细胞(BMSC)饲养层对人胚胎生殖细胞(hEGC)生长的支持作用。方法:以非意愿妊娠流产胎儿股骨为材料制备BMSC饲养层;同时取胎儿组织分离培养人成纤维细胞,以成纤维细胞培养液上清制备条件培养液(CM)。另取13.5d胎鼠制备原代小鼠胎儿成纤维细胞(PMEF)饲养层。分组培养人原始生殖细胞:A组(PMEF饲养层)、B组(BMSC饲养层)、C组(CM)、D组(BMSC饲养层+CM),观察不同条件下hEGC生长增殖行为。结果:D组与A组均有利于支持人胚胎生殖细胞的体外生长,并保持其不分化的状态和多分化的潜能,两组比较无明显差异。单用B组可支持人胚胎生殖细胞的体外生长,但效率低于上述两组。单用条件培养液不能获得贴壁生殖细胞克隆。结论:BMSC饲养层+CM可支持hEGC的体外培养,且无异源性蛋白的污染,更有利于临床应用。     

间充质干细胞对肿瘤细胞的分子作用机制

间充质干细胞(MSC)不但对肿瘤细胞具有良好的靶向性,而且可以直接抑制肿瘤生长或作为新兴的基因治疗载体在肿瘤局部持续高效地表达外源基因,抑制肿瘤的生长和转移.同时,MSC也可通过促进肿瘤间质重构和肿瘤血管形成、抑制肿瘤局部机体免疫以及改变肿瘤表型而促进肿瘤生长.相反的作用机制可能与MSC的来源、异质性、肿瘤细胞微环境或...     

胚胎干细胞向造血干细胞的定向诱导分化

造血干细胞移植可为超高剂量化疗治疗卵巢恶性肿瘤提供必要的支持治疗,提高其治愈率.胚胎干细胞的定向诱导分化将为造血干细胞移植提供大量增殖能力强的细胞来源.就胚胎干细胞定向诱导分化为造血细胞的方法、重建造血功能情况及诱导分化过程中基因调控、基质细胞和造血生长因子的作用综述.     

宫颈锥切术后患者接种HPV疫苗的可行性及机制探讨

宫颈癌是严重威胁女性生命健康的常见恶性肿瘤之一,与高危型HPV(人乳头瘤病毒)感染密切相关,近年来呈发病率增高、人群年轻化趋势.宫颈癌是目前唯一可早期预防、筛查和治疗的癌症,通过对宫颈病变的治疗,能有效降低宫颈癌的发生率.HPV疫苗可抵抗病毒感染,预防90％宫颈癌的发生.在尚无治疗性疫苗上市的现况下,预防性疫苗是否具有...     

宫腔镜电切术治疗子宫黏膜下肌瘤173例临床效果分析

目的 :探讨宫腔镜电切术治疗子宫黏膜下肌瘤的临床效果。方法 :回顾性分析 173例子宫黏膜下肌瘤患者接受宫腔镜电切术后的治疗效果。结果 :173例子宫黏膜下肌瘤患者均一次完成手术 ,无子宫穿孔、出血及肠管损伤发生 ,2例轻微水中毒。切除肌瘤直径大小 1～ 6cm ;肌瘤数目 1～ 4个 ;手术时间 5～ 85min ,平均2 8min。术中估计出血量 2 0～ 10 0ml(Desonol法 ) ;膨宫液用量 5 0 0～ 2 80 0ml;膨宫液吸收量 2 0 0～ 930ml。术后随诊 3～ 30个月 ,其中 6例失访 ,1例因“子宫平滑肌肉瘤”接受全子宫及双侧附件切除手术 ,其余 16 6例均定期来院复查 ,随诊率达 96 .0 %。 15 1例患者月经量过多者症状均得到显著改善 ,其中 14 0例月经恢复正常 ,其余 11例月经量较前显著减少 ,周期恢复正常。在 94例不孕症或反复自然流产患者中 ,术后已妊娠 72例 ,其中足月分娩者 4 8例 ,无宫腔感染、宫腔粘连等并发症。结论 :在治疗子宫黏膜下肌瘤方面 ,宫腔镜电切术是一种安全、有效并且是首选的方法 ,能显著的改善术后月经状况以及受孕率。     

胚胎干细胞向造血干细胞的定向诱导分化

造血干细胞移植可为超高剂量化疗治疗卵巢恶性肿瘤提供必要的支持治疗，提高其治愈率。胚胎干细胞的定向诱导分化将为造血干细胞移植提供大量增殖能力强的细胞来源。就胚胎干细胞定向诱导分化为造血细胞的方法、重建造血功能情况及诱导分化过程中基因调控、基质细胞和造血生长因子的作用综述。