脂质体转染AFP基因构建树突状细胞肝癌瘤苗及体外活性检测

目的：探讨以ＡＦＰ为靶点，构建ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗及其抗肝癌免疫治疗的可能性。方法：应用脂质体将ＡＦＰ基因转染体外培养的未成熟 ＢＭＤＣ，构建 ＡＦＰ－ＤＣ肝癌瘤苗，以流式细胞术、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、３Ｈ－ＴｄＲ法和 ＭＴＴ法等检测其免疫活性。结果：ＡＦＰ－ＤＣ瘤苗不仅能产生和分泌ＡＦＰ，而且能上调自身的Ｂ７分子和ＭＨＣ分子，明显刺激Ｔ细胞增殖及提高ＣＴＬ的杀伤作用。结论：提示肝癌相关基因ＡＦＰ可作为抗肝癌基因治疗的切入点。     

基因芯片对PMA激活的血管内皮细胞早期反应基因的研究

目的 :用基因芯片研究 PMA激活的血管内皮细胞的早期反应基因 (imm ediate early response gene,ERG)。方法 :以包含 40 96条人类基因的 DNA芯片检测血管内皮细胞受代谢增强剂 PMA(phorbol myristate acetate)激活后早期的基因表达谱 ,并从中筛查出 ERG。结果 :血管内皮细胞受 PMA作用 6 h后 ,17条基因上调 ,11条下调。数据处理聚类分析表明 17条上调基因中多数 (13/ 17)属蛋白质磷酸酶和转录调控因子基因 ,而下调基因中多数 (9/ 11)为细胞分裂相关基因。结论 :证明PMA激活的人血管内皮细胞早期反应基因主要是转录调控因子和蛋白质磷酸酶基因。     

291例溃疡性结肠炎患者中溶质相关载体26A3基因多态性分析

目的 探讨溶质相关载体（SLC）26A3基因单核苷酸多态性（SNP）与溃疡性结肠炎（UC）的关系。方法 收集291例UC患者和380例正常对照者,采用多重SNaPshot技术检测SLC26A3 （rs7810937、rs7785539和rs2108225） 3个SNP位点的等位基因及基因型,并进行连锁不平衡和单倍型分析。结果 UC组中（rs2108225）突变等位基因（G）和基因型（AG+GG）的频率均高于对照组（65.46% vs 58.68%,P=0.011;87.29% vs 81.58%,P=0.045）。与轻中度UC患者相比,重度UC患者中（rs7785539）突变等位基因（C）和基因型（GC+CC）的频率均显著增高（15.79% vs 6.13%,P=0.003;26.32% vs 12.25%,P=0.020）。（rs7810937,rs7785539和rs2108225） 3个SNP位点彼此连锁,但UC和对照组中各单倍型差异无统计学意义（P>0.05）。结论 SLC26A3 （rs2108225）基因突变可能增加UC发病风险,rs7785539基因多态性与UC疾病严重程度相关,（rs7810937、rs7785539和rs2108225）构建的单倍型与UC发病风险无关。     

头颈部鳞状细胞癌预后相关的miRNAs的生物信息学分析

目的 利用癌症基因组图谱（TCGA）数据库微小核糖核酸（miRNAs）表达谱数据分析头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）与癌旁正常组织间差异表达的miRNAs,结合临床信息寻找与HNSCC预后相关的miRNAs。方法 从TCGA中下载miRNAs表达数据,包括39例HNSCC患者和39个肿瘤邻近正常组织样本筛选差异表达的miRNAs,应用481例HNSCC患者的miRNAs表达谱和临床信息来评估找到的差异表达miRNAs的预后作用。结果 共筛选出114个差异表达的miRNAs,包括60个上调和54个下调的miRNAs。Kaplan-Meier生存分析显示miR-4652-5p和miR-99a-3p与HNSCC患者预后相关,单因素和多因素Cox回归分析显示,miR-4652-5p和miR-99a-3p是HNSCC的重要预后因素。结论 miR-4652-5p和miR-99a-3p与HNSCC患者预后相关,但miR-4652-5p和miR-99a-3p在头颈鳞状细胞癌发生发展中的分子机制仍需更全面的基础和临床研究进行探讨。     

三七皂甙对造血细胞GATA-1和GATA-2转录调控蛋白的诱导作用

目的　观察三七总皂甙 (PNS)对锌指结构GATA族转录调控蛋白的诱导作用 ,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径。方法　选择恰当浓度的PNS作用于正常人骨髓单个核细胞、HL 6 0、K5 6 2、CHRF 2 88和Meg 0 1细胞 ,2周后提取核蛋白 ,用GATA 1和GATA 2抗体行Western印迹杂交 ,检测GATA 1和GATA 2的表达情况。用3 2 P标记的GATA双链寡核苷酸探针行电泳带移动阻滞试验 (EMSA)和抗体胶移动实验 ,检测GATA DNA复合物及亚型。结果　PNS能够促进人骨髓红系、粒系祖细胞增殖。Western印迹杂交显示PNS诱导K5 6 2、CHRF 2 88和Meg 0 1细胞的GA TA 1和GATA 2蛋白表达量增高 ,分别是未经处理细胞的 1 .5～ 2 .8倍和 2 .0～ 3.1倍 ;EMSA结果表明PNS诱导三株细胞的GATA DNA结合复合物条带密度明显增高 ;HL 6 0细胞在PNS处理前后均未显示GATA活性。抗体胶移动实验证明PNS诱导的GATA DNA复合物的主要成分为GATA 1和GATA 2。免疫沉淀显示PNS诱导的GATA 1和GATA 2蛋白均处于磷酸化的功能激活状态。结论　PNS可通过诱导GATA 1和GATA 2蛋白合成增加 ,与相关基因上游调控区的启动子和 (或 )增强子结合的活性增高 ,而调控与造血细胞增殖、分化相关基因的表达     

新型光敏剂叶绿素三酸对小鼠S_(180)移植瘤抑瘤作用探讨

光动力学疗法是70年代发展起来的一种治疗肿瘤的新技术,需要高效的光敏剂和匹配的光源。本文选用新型光敏剂叶绿素三酸(Chlorineb)及He—Ne激光对小鼠S_(180)移植瘤的抑瘤作用进行了探讨。     

DC融合瘤苗治疗大鼠腹腔播散性卵巢癌

目的:研究树突状细胞(DC)与卵巢癌融合的融合瘤苗对大鼠腹腔播散性卵巢癌的治疗作用,并观察其体内应用的安全性。方法:用聚乙二醇法将Fischer344(F344)大鼠骨髓来源的DC与卵巢癌上皮细胞株NuTu19细胞在体外融合制备融合瘤苗(DCNuTu19)。流式细胞术检测DCNuTu19的免疫相关表型。将DCNuTu19接种于F344大鼠皮下,观察它在体内的成瘤性。用乳酸脱氢酶释放法检测经过DCNuTu19免疫的大鼠脾细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对NuTu19细胞的杀伤作用。复制腹腔播散性卵巢癌的F344大鼠模型,观察DCNuTu19对它的治疗作用。结果:DCNuTu19高表达主要组织相容性复合物II(MHCII)分子OX6、共刺激分子B72、细胞间粘附分子ICAM1和大鼠DC的标志性抗原整合素OX62。与NuTu19相比,DCNuTu19在大鼠体内成瘤率降低,成瘤时间延迟,两组平均瘤重具有统计学差异(P<0.05)。经DCNuTu19免疫的大鼠脾CTL对NuTu19细胞的杀伤活性显著增高(P<0.01)。与对照组相比,经DCNuTu19治疗后大鼠的病情发展速度减缓,生存期明显延长(P<0.01)。结论:卵巢癌DC融合瘤苗能显著提高大鼠CTL杀伤活性,诱导高效而特异的抗卵巢癌免疫效应,延长患有腹腔播散性卵巢癌大鼠的生存时间。     

肝再生大鼠血清诱导骨髓干细胞向肝细胞分化的实验研究

目的观察肝大部切除大鼠再生血清和肝细胞生长因子(HGF)诱导骨髓干细胞向肝实质细胞分化的作用；探讨骨髓干细胞向肝细胞分化和增殖的体外培养条件和方法，为患者应用自身骨髓细胞修复损伤肝脏提供实验依据。方法制作肝大部切除大鼠肝再生动物模型，收集术后24h血清；分别应用鼠肝再生血清和HGF对大鼠骨髓细胞进行定向诱导分化培养；以免疫组化、RTPCR和western blot等方法对分化不同阶段细胞进行检测。将分化细胞经尾静脉输入同系大鼠，观察输注细胞在肝、脾内的生长情况。结果活体移植分化细胞能定向迁移至肝和脾；体外及体内分化细胞在mRNA水平和蛋白质水平均表达白蛋白，并在一定时期内表达甲胎蛋白。结论大鼠骨髓干细胞在肝大部切除再生血清或HGF的诱导下能横向分化为肝实质样细胞。     

穿心莲内酯过饱和自微乳化释药系统的制备及体外评价

目的:优选穿心莲内酯过饱和自微乳化释药系统的处方工艺,以提高穿心莲内酯的溶解度及生物利用度。方法:通过溶解度试验及伪三元相图的工艺初步筛选后,采用单纯形网格法,以粒径、多分散指数和乳化时间为指标,确定穿心莲内酯自微乳的处方;以析晶情况、粒径、多分散指数、乳化时间以及穿心莲内酯的溶出度为考察指标筛选最佳促过饱和抑制剂。结果:穿心莲内酯过饱和自微乳处方为油酸乙酯-(聚山梨酯-80)-聚乙二醇400-羟丙基甲基纤维素K4M(20∶35∶45∶1)。穿心莲过饱和自微乳乳化后的平均粒径(29.26±0.56)nm,多分散指数0.19±0.02,Zeta电位(-10.23±2.34)mV,乳化时间(62.39±2.03)s,1 h累积溶出度高达91%。结论:加入羟丙基甲基纤维素K4M后可明显抑制穿心莲内酯自微乳液的析晶时间,增加自微乳的稳定性;相较于普通自微乳可明显提高穿心莲内酯的体外溶出度,进而提高该成分的生物利用度。     

核因子-κB对小鼠树突状细胞分化成熟及其体外刺激T细胞免疫反应的影响

目的　探讨在小鼠树突状细胞 (DC)成熟过程中核因子 κB(NF κB)基因的作用。方法　应用特异性NF κB寡聚脱氧核苷酸诱骗剂 (NF κBODNDecoys)阻断NF κB活性 ,观察DC形态、细胞表面分子表达以及同种T淋巴细胞增殖反应的变化 ,了解NF κB基因对DC成熟及免疫生物活性的影响。结果　NF κBODNDecoys的有效摄取 ,抑制了DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达和白细胞介素 1 2 (IL 1 2 )的分泌 ,阻碍了DC的发育成熟 ,这种阻碍作用不可被脂多糖 (LPS)所逆转。混合淋巴细胞反应显示 ,NF κBODNDecoys的应用可诱导DC刺激同种T淋巴细胞低反应活性 ,抑制了T细胞IL 2和γ 干扰素 (IFN γ)的分泌。结论　NF κB是DC发育成熟过程中关键性调控基因。应用NF κBODNDecoys可抑制DC的成熟 ,从而为生成耐受原性未成熟DC、诱导移植免疫耐受提供了一种新的途径