22234例子宫颈高危型HPV感染及亚型分布研究

目的:分析17种型别的高危型人乳头瘤病毒(HPV)在22234例子宫颈癌筛查中的感染率及亚型分布特点。方法:回顾性分析2018年1月1日至2019年1月1日22234例于华中科技大学同济医学院附属协和医院行子宫颈癌筛查患者高危型HPV感染率及感染亚型。结果:22234例接受子宫颈癌筛查患者中,一种或以上高危型HPV阳性者3574例(16.1%),其中HPV16或(和)HPV18阳性者703例(3.2%)。在3574例高危型HPV阳性女性中,最常见的高危HPV感染是HPV52(24.4%),其次为HPV58(16.5%)、HPV16(14.0%)、HPV53(12.6%)和HPV39(8.6%)。与HPV16阴性患者相比,在HPV16阳性的患者中,除HPV31、HPV35、HPV45、HPV26和HPV82以外的12种高危型HPV的感染风险均显著降低约2~5倍(OR 0.169~0.530,P<0.05);与HPV18阴性患者相比,HPV18阳性的患者中HPV16、HPV33、HPV39、HPV51、HPV52、HPV58和HPV53的感染风险均显著下降(P<0.05)。结论:女性高危型HPV感染率较高,最常见的高危型HPV是HPV52和HPV58感染,并且HPV16、18感染对多个其他型别高危型HPV感染有保护作用。     

抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性影响的研究

目的:研究抑制卵巢癌A2780/Taxol细胞hsa-miR-27a表达对紫杉醇敏感性的影响。方法:用浓度递增法建立卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;Stem-loop real-time PCR技术检测A2780/Taxol及亲本细胞A2780中hsa-miR-27a表达水平;利用脂质体Lipofectamine2000将化学合成的miR-27a抑制物及阴性对照(Negative Control,NC)转染A2780/Taxol细胞;分别用Real-time PCR和蛋白印迹法技术检测MDR1mRNA和P-glyco-protein(P-gp)蛋白表达;MTT检测A2780/Taxol对紫杉醇敏感性的变化;流式细胞术检测细胞内P-gp荧光底物罗丹明123(Rh-123)的荧光强度。结果:(1)成功建立了卵巢癌耐紫杉醇细胞系A2780/Taxol;(2)miR-27a在A2780/Taxol细胞中高表达,与A2780细胞相比,表达增高2.2倍。(3)P-gp蛋白在A2780/Taxol细胞中高表达,在A2780细胞中未检测出其表达;(4)转染miR-27a抑制物后,A2780/Taxol细胞的MDR1mRNA和P-gp表达下降,与转染NC组相比,P-gp表达降低36%;对紫杉醇的敏感性增加,IC50为0.53μmol/L,与转染NC组IC506.8μmol/L相比,有明显差异;(5)流式细胞仪结果显示,细胞内Rh-123荧光强度在转染抑制物的A2780/Taxol细胞为5.10±0.35,与A2780/Taxol细胞的2.95±0.39和转染NC的A2780/Taxol细胞的3.30±0.45相比,差异均有统计学意义。结论:hsa-miR-27a在卵巢癌耐紫杉醇A2780/Taxol细胞中高表达,可能通过间接调节P-gp的表达和功能,参与耐药。抑制miR-27a表达后,可以增加A2780/Taxol细胞对紫杉醇的敏感性,部分逆转耐药。     

EZH2 shRNA真核表达载体的构建及其在卵巢癌A2780细胞系的稳定表达

目的 采用基因工程技术,构建EZH2 shRNA的真核表达载体,获得稳定表达干扰质粒的卵巢癌A2780细胞系.方法 合成特异性干扰EZH2的shRNA片段并定向克隆插入Supersilencing shRNA质粒表达载体pGPU6/GFP/Neo,获得表达载体pGPU6/GFP/Neo-shEZH2.脂质体介导重组质粒转染A2780细胞,经G418加压筛选获得稳定转染细胞株,Real time RT-PCR和Western blot检测转染后细胞系EZH2的表达.结果 测序结果证实重组载体构建成功,稳定转染shEZH2的A2780细胞EZH2的mRNA和蛋白水平下降(90.20±1.66)%和(73.80±5.49)%,P＜0.01,差异有统计学意义. 结论成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的A2780细胞系,为进一步研究以EZH2为靶点的卵巢癌治疗奠定实验基础.     

Livin基因为靶向的RNA干扰技术对宫颈癌SiHa细胞的化疗增敏作用

目的:研究凋亡抑制基因Livin为靶向的RNA干扰技术(RNAi)对增加人宫颈癌细胞系SiHa化疗敏感性的作用及价值。方法:用已经构建好的针对Livin基因的短发夹RNA真核表达载体(shLivin),转染宫颈癌SiHa细胞,分为空白对照组(SiHa组)、SiHa-shLivin组和转染空载体的SiHa-shVector组。选用顺铂、紫杉醇、多柔比星作为化疗药物,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测加药后3组细胞的增殖情况,得出半数抑制浓度(IC50)值,用流式细胞术检测3组细胞在shLivinIC50的凋亡率进行比较。结果:shLivin重组质粒稳定转染SiHa细胞后,SiHa-shLivin组对顺铂、紫杉醇、多柔比星的IC50值明显低于SiHa组和SiHa-shVector组,差异有高度统计学意义(P<0.001),SiHa组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。用shLivinIC50药物浓度处理细胞,SiHa-shLivin组凋亡率明显高于SiHa-shVector组和SiHa组,差异有高度统计学意义(P<0.001),Si-Ha组与SiHa-shVector组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:以Livin基因为靶向的RNA干扰技术可增加化疗药物的敏感性,作为宫颈癌细胞化疗增敏的分子靶点,其基因沉默有望成为宫颈癌基因治疗新手段。