人微小RNA-16（miR-16）重组腺病毒的制备和鉴定

目的制备人微小RNA-16（miR-16）重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质干细胞（hMSCs）中的表达及对细胞周期素依赖蛋白激酶6（CDK6）表达的影响。方法从人基因组DNA中扩增miR-16前体的DNA,定向插入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV。将经PmeⅠ线性化的重组穿梭载体pAdTrack-CMV-miR-16与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,在细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒rAdTrack-miR-16。将经PacⅠ线性化的rAdTrack-miR-16在人胚肾293细胞（HEK293）中包装并扩增出miR-16的重组腺病毒rAd-miR-16。将重组腺病毒感染hMSCs,分别检测miR-16前体和miR-16靶基因CDK6的表达。结果 pAdTrack-CMV-miR-16构建正确,在HEK293细胞中成功包装并扩增出重组腺病毒rAd-miR-16。rAd-miR-16感染的hMSCs中miR-16前体水平显著升高（P〈0.05）,CDK6mRNA的表达降低不明显,CDK6蛋白表达水平显著降低（P〈0.01）。结论成功制备了表达人miR-16的重组腺病毒,并能有效介导miR-16在hMSCs中的表达,为进行miR-16的功能研究创造了条件。     

活性氧检测在男性不育中的应用价值

在引起男性不育的众多因素中,活性氧的作用越来越受到人们的关注。有研究表明,精液中少量的活性氧是精子受精、获能等生理过程中所必需的,但过量活性氧可造成氧化应激,导致精子密度、活力下降,抑制精子获能和顶体反应,还可使精子DNA发生氧化损伤而导致男性不育。因此,活性氧检测在男性不育中具有重要作用。     

血清游离睾酮与勃起功能障碍的关系

目的研究血清游离睾酮与勃起功能障碍（erectile disfunction,ED）的关系,探讨不同年龄组印患者血清游离睾酮水平。方法按不同年龄段将ED患者分为5个组,采用ELISA法对血清游离睾酮水平进行检测。用t检验对结果进行统计学分析。结果不同年龄组（〉60岁、50-60岁、40-50岁、30-40岁及〈30岁组）ED患者血清游离睾酮水平分别为：（1922＋1042）ng／L、（19．94±1054）ng／L、（24.37±13.25）ng／L、（2227±1107）ng／L及（2564±1367）ng／L。各组血清游离睾酮水平均在正常值范围内。统计学分析结果表明,不同年龄组之间印患者血清游离睾酮水平无明显差异。结论血清游离睾酮与勃起功能障碍无直接关系。血清游离睾酮水平与印患者年龄无显著相关性,说明随年龄增长所发生的ED与血清游离睾酮水平无关。     

辅助生殖技术中8993例不孕不育患者染色体核型结果分析

目的了解不孕不育患者染色体核型异常率、异常类型及分布情况,探讨染色体核型异常与不孕不育的关系,为优生及辅助生殖技术中治疗方案的合理选择提供指导。方法选取2016年5月至2021年4月我院生殖中心收治的拟行辅助生殖技术助孕的不育不孕患者进行外周血染色体核型分析。结果在所检测的8993例研究对象中:(1)共检出330例染色体核型异常,异常率为3.67%,异常率明显高于正常人群水平。其中男性患者染色体异常率明显高于女性患者(6.69%vs 1.12%),差异具有统计学意义。男性患者中性染色体异常率要明显高于常染色体异常率,而女性患者性染色体异常率与常染色体异常率比较无显著差异。(2)共检出134例染色体核型多态,多态率为1.49%,男患者染色体多态率比女性稍高,差异具有统计学意义。(3)在染色体核型异常构成比方面:男性患者明显高于女性患者(83.33%vs 16.67%),其中最常见的性染色体异常类型为数目增加,最常见的常染色体异常类型为结构异常。(4)在染色体核型多态构成比方面:男性患者高于女性患者(57.46%vs 42.54%),差异具有统计学意义,其中最常见的常染色体多态类型为9号染色体倒位,最常见的性染色体多态类型为小Y。结论染色体异常是导致不孕不育的一个重要因素,在辅助生殖技术过程中有必要对夫妻双方进行染色体核型筛查,并根据核型结果决定治疗方案,以避免盲目治疗、不良妊娠及缺陷后代的出生。     

南昌地区1000例在校大学生精液质量分析

招募南昌地区在校大学生供精志愿者1000名按《世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手册》(第5版)进行精液常规检测,获得相关的精液参数常规指标:精液量、粘稠度、PH值、密度、活力、畸形率等。对所招募的1000名志愿者精液参数分析表明精液量、PH值、密度、活力、畸形率的平均值分别为:3.4+1.4ml、7.6+0.3、(50+19)×106/ml、49.6%+12.4%及8.3%+1.6%,各参数平均值均在正常参考值范围内。在1000名志愿者中,精液参数未达到标准的有205例,不合格率为20.5%。有效掌握现阶段南昌地区在校大学生精液的相关数据,来评估南昌地区在校大学生生殖健康现状,对指导大学生生殖健康教育提供可靠依据。     

谷氨酰胺-丙氨酸二肽在不同培养基中应用效果研究

目的探索不同浓度的丙氨酸-谷氨酰胺二肽在序贯培养基及一程式培养基中的培养效果和最佳浓度。方法丙氨酸-谷氨酰胺二肽分别按0.7、0.85、1.0、1.15和1.3mmol/L配制序贯系列培养基的囊胚培养液和一程式培养基,将上述培养基分组分别用于小鼠受精卵的体外常规培养,100~104h后,观察其囊胚形成率和孵化率,并以商品化的GⅢ培养基作对照组。结果在序贯培养基中除1.3mmol/l组的囊胚形成率和孵化率显著降低以外,其余各组件均为显著性差异;在一程式培养基中,0.7、0.85和1.0mmol/L组的囊胚形成率明显高于其它各组,但0.7mmol/L组的孵出率显著高于其它各组。结论在体外培养基中,丙氨酸-谷氨酰胺二肽的浓度低于1.0mmol/L时可能更有利于体外培养中小鼠胚胎的发育。     

三七总皂苷抗细胞凋亡作用与MIF/AMPK的关系研究

目的我们前期的研究表明三七总皂苷(panaxnotoginseng saponin,PNS)能够抗SGOD(serum,glucoseand oxygen deprivation)诱导的H9c2细胞凋亡,本论文我们进一步探讨PNS抗缺血诱导的心肌细胞凋亡的可能作用机制。方法将心肌H9c2细胞株分为正常对照组(control),模型组(model)和PNS组。DCFH-DA和JC-1荧光探针分别检测细胞内活性氧的水平和线粒体膜电位,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测MIF,AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)以及cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果与model组比较PNS能够稳定线粒体膜电位,降低胞内ROS水平;PNS抗细胞凋亡的作用能够被MIF拮抗剂ISO-1显著逆转(P=0.000);Western blot结果显示SGOD处理后能够明显的升高胞内活化的caspase-3蛋白(cleaved caspase-3)的表达水平,同时升高MIF和p-AMPK蛋白的表达水平,而PNS能够显著的降低cleaved caspase-3的蛋白水平,并进一步促进MIF和p-AMPK蛋白的表达。结论 PNS能够抗线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡的机制与激活MIF/AMPK有关。本研究将为进一步探讨PNS保护心脏的分子机制及将PNS更好地应用于临床治疗提供有意义的实验依据。     

血清游离睾酮浓度与男性年龄的相关性研究

目的：检测不同年龄组男性血清游离睾酮水平,研究血清游离睾酮与男性年龄的相关性。方法：按不同年龄段受试者分为5个组,采用ELISA法对血清游离睾酮水平进行检测。用方差分析和相关性检验对结果进行统计学分析。结果：不同年龄组（〉60岁、50-岁、40-岁、30-岁及〈30岁组）受试者血清游离睾酮水平分别为：16．23＋10．45ng／L、18．82＋10．54ng／L、23．55＋13．25ng／L、22．27＋11．07ng／L及24．39＋13．43ng／L。统计学分析结果表明,〈30岁、30-岁及40-岁组与〉60岁、50-岁组相比有明显差异（P〈0．05）。血清游离睾酮的浓度与男性年龄成显著负相关（P〈0．05）。结论：本研究证实在50岁后,随年龄增长男性体内血清游离睾酮表达水平呈下降趋势,这在病理和生理上对临床工作都具有指导意义。     

精子形态与精子活力的相关性分析

目的探讨精子形态与精子活力之间的关系。方法对男性不育患者精液标本进行常规检查,并用改良巴氏染色法进行精子形态学分析。结果精子形态正常组精子活力明显高于精子形态异常组,差异具有显著性(P<0.01);精子活力正常组形态正常精子百分率高于精子活力异常组,差异具有显著性(P<0.01)。结论精子形态正常百分率与精子活力之间呈正相关关系。精子形态异常率增高可导致精子活力降低,从而引起男性不育。     

甲硝唑诱导阴道毛滴虫凋亡样细胞死亡

目的凋亡或程序性细胞死亡在多细胞生物体中已经被广泛研究,然而,关于单细胞寄生性原生动物细胞凋亡发生的分子机制却知之甚少。本研究旨在了解甲硝唑诱导阴道毛滴虫细胞凋亡的特征。方法培养阴道毛滴虫并用不同浓度的甲硝唑进行处理。在不同的时间间隔进行活细胞计数。提取甲硝唑处理过的阴道毛滴虫基因组进行DNA断裂片段检测。用DNA断端末端标记(TUNEL)法测定甲硝唑处理后阴道毛滴虫核酸内切酶活性。流式细胞检测分析脂酰丝氨酸暴露情况。结果甲硝唑可以诱导阴道毛滴虫出现凋亡样细胞死亡。这种凋亡样细胞死亡表现为细胞皱缩,磷脂酰丝氨酸暴露以及核染色体凝聚,但并未检测到寡核苷酸DNA梯带。结论阴道毛滴虫程序性细胞死亡的调节通路不同于多细胞生物体。确定导致原生动物细胞死亡的凋亡通路也许最终可用于鉴定新的治疗靶点。