HER-2/neu胞外区基因疫苗的免疫避孕作用

目的 :研究HER 2 neu胞外区基因疫苗在免疫避孕中的作用。方法 :构建含人HER 2 neu胞外区的重组质粒pcDNA3 hECD ,以该质粒转染真核细胞C2 C1 2 或注射小鼠股四头肌 ,检测其在体内外表达情况 ;以该质粒基因免疫雌性BALB C小鼠 ,部分小鼠于第 12周以重组蛋白hECDu加强免疫 ,以ELISA方法检测抗HER 2 neu抗体应答 ,3H TdR掺入法检测细胞免疫应答 ,并观察其诱导免疫避孕的情况。结果 :C2 C1 2 转染上清及小鼠股四头肌注射局部均可检测到hECD蛋白的表达。小鼠经基因免疫后可产生较高水平抗体应答 ,抗体水平至少维持 2 8周 ,同时可检测到较高水平细胞免疫应答 (pcDNA3 hECD与对照组SI值分别为 9 5 5和 1 2 5 ) ;基因免疫后小鼠平均产仔数 (3 8± 2 9,对照组为 9 7± 1 6 )明显降低 ,以蛋白加强免疫后产生特异性回忆反应 ,平均产仔数进一步降低 (2 0± 1 7)。而且 ,免疫小鼠产后 4天子宫及卵巢与正常产后鼠相比均无明显区别。结论 :基于HER 2 neu胞外区的基因疫苗免疫小鼠可诱导有效的免疫应答并产生一定免疫避孕效果 ,并且这种避孕作用经特异性蛋白加强免疫可进一步得以提高。     

基于基因免疫的抗HBV M蛋白单克隆抗体的制

目的 以基因免疫制备抗乙型肝炎病毒M蛋白的单克隆抗体。方法 构建表达M蛋白的重组质粒pcDNA3-PreS2／S，免疫雌性BALB／c小鼠，以杂交瘤技术制备单克隆抗体。结果 目的基因片段PreS2／S(875bp)正确插入质粒pcDNA3，重组质粒转染细胞上清、基因注射肌肉、脾脏局部均可检测到M蛋白表达。免疫小鼠后以杂交瘤技术获得了一株分泌抗HBVM蛋白的杂交瘤细胞株2D3。结论 证实了基因免疫可用于制备抗乙型肝炎病毒M蛋白单克隆抗体。     

HER-2/neu胞外区的基因工程表达及其免疫避孕作用

目的:研究HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白疫苗在免疫避孕中的作用。方法:构建原核表达重组体pET-hECDu,在大肠杆菌中表达人HER-2/neu胞外区部分片段,经Hi-Trap亲和层析柱纯化得到重组蛋白(hECDu),以ELISA法检测其结合活性后免疫雌性小鼠。用ELISA法检测抗HER-2/neu体液免疫应答,3H-TdR掺入法检测细胞免疫应答。结果:经原核表达系统成功纯化得到与理论分子量77 ku(1 u=1 Da)相符的hECDu,并证实其可与抗HER-2/neu胞外区特异性单克隆抗体结合。该重组蛋白疫苗可诱导雌鼠产生较高水平体液及细胞免疫应答。其生育力(平均产仔数4.0±1.8)与对照组(7.8±1.3)相比明显降低,但免疫鼠产后4 d子宫及卵巢均无明显病理改变。结论:经原核表达系统成功纯化得到HER-2/neu胞外区部分片段重组蛋白,该蛋白疫苗可在小鼠中诱导产生免疫避孕效应。