应用人精子头-尾膜完整性试验对生育力组及不育组精液的评价

目的应用人精子头-尾膜完整性试验,比较生育力组与不育组男性精液4种精子膜完整性类型的差异.方法精液标本分为生育力组(n=32)和不育组(n=50),采用"低渗肿胀-伊红拒染"结合试验,检测人精子头-尾膜完整性.结果头膜尾膜均损伤的Ⅰ型精子和头膜损伤-尾膜完整的Ⅲ型精子,生育组和不育组存在明显差异(P<0.01);头膜完整-尾膜损伤的Ⅱ型精子,生育组和不育组无明显差异(P>0.05);头膜-尾膜均完整的Ⅳ型精子,生育组明显高于不育组(P<0.01);Ⅳ型精子率与生育组精子活动率(n=32, r=0.82,P<0.01)和不育组精子活动率(n=50,r=0.80,P<0.01)均呈显著相关性.结论生育组具有较多头膜-尾膜均完整的精子."低渗肿胀-伊红拒染"结合试验能够清晰显示包括过渡型膜损伤的4种膜完整性类型的精子,精子头-尾膜完整性可以作为评价精子生理学的一项检测指标.     

磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯对人肾小管上皮细胞HKC的毒性效应及凋亡机制研究

目的 探讨磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯[tris(1,3-dichloro-2-propyl) phosphate, TDCPP]对人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells, HKC)的凋亡作用,并基于线粒体凋亡途径探讨其效应机制。方法 选取HKC作为受试细胞,经TDCPP(0、25、50、75和100μmol/L)染毒48 h后,利用CCK-8方法检测HKC的细胞存活率,通过高内涵成像系统观察细胞形态,采用基于细胞成像的多参数分析技术,检测TDCPP对线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)、细胞凋亡及线粒体凋亡途径相关蛋白表达量的影响。结果 随着TDCPP暴露浓度的增加,HKC存活率明显降低(F=54.671;P<0.05)。TDCPP浓度高于75μmol/L时,细胞形态发生明显改变,MMP明显降低(F=24.923;P<0.05),细胞凋亡率增加(F=29.303;P<0.01),线粒体凋亡途径相关蛋白,包括Bcl-2相关X蛋白(B_(ax))、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素c和活化的半胱氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)的表达量以及B_(ax)/Bcl-2的比值均明显增加(F_(B_(ax))=21.152,PB_(ax)<0.01;FBcl-2=118.788,PBcl-2<0.05;F细胞色素c=40.576,P细胞色素c<0.01;F_(caspase-3)=70.067,P_(caspase-3)<0.01;F_(B_(ax))/Bcl-2=12.192,P_(B_(ax)/Bcl-2)<0.01;)。结论 TDCPP可引起HKC线粒体受损,MMP下降,细胞凋亡率增加,线粒体凋亡途径在TDCPP引起的肾细胞凋亡中起到一定的调控作用。     

磷酸三苯酯和磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯对小鼠精母细胞DNA损伤和细胞周期的影响

目的 探讨不同剂量的磷酸三苯酯(TPhP)和磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCPP)对小鼠精母细胞DNA损伤和细胞周期的影响。方法 选取小鼠精母细胞(GC-2)为细胞模型,经TPhP和TDCPP(0、3、10、30和50μmol/L)染毒48 h后,利用CCK-8方法检测GC-2的细胞存活率,采用高内涵分析系统检测TPhP和TDCPP对细胞核碎片化程度、磷酸化组蛋白(pH2AX)、DNA同源重组修复蛋白(Rad51)及细胞周期等参数的影响。实时荧光定量PCR法分析精母细胞生长发育关键调控基因,包括环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB-1)、抑制素-α (inhibin-α)、粘连蛋白2(nectin-2)和增殖标记蛋白(Ki67)mRNA的表达水平。结果 与对照组相比,30和50μmol/L TPhP和TDCPP均显著降低GC-2细胞存活率(P<0.05),并引起细胞核碎片化程度加剧(P<0.01)。DNA损伤标志物pH2AX在10、30和50μmol/L TPhP组及TDCPP组均显著升高(P<0.05),Rad51蛋白在30和50μmol/L TPhP组和1...     

青春期大鼠受己烯雌酚持续作用对成年后睾丸结构与功能的影响

目的：探讨青春期大鼠受己烯雌酚(DES)持继作用后的睾丸损伤,损伤后在成年期的睾丸结构及生精功能能否恢复。方法：青春期雄性SD大鼠48只,随机均分成：A_1、B_1、C_1和D_1组；A_2、B_2、C_2和D_2组。分别隔日腹腔注射含DES0μg·kg~(-1)·d~(-1)(A_1,A_2,为对照组)、2μg·kg~(-1)·d~(-1)(B_1,B_2)、10μg·kg~(-1)·d~(-1)(C_1,C_2)和50μg·kg~(-1)·d~(-1)(D_1,D_2)的玉米油0.3 ml,28 d后处死A_1-D_1组动物采集标本。A_2-D_2组则继续正常饲养60 d(恢复期),然后处死动物取材。检测大鼠体重(BW)、睾丸重量(TW)、附睾重量(EW)、睾丸每日精子生成量(DSP)以及附睾尾精子数(ESC)等5项参数的变化,应用光镜观察睾丸生精上皮的组织学变化。结果：B_1组的TW、DSP和ESC显著低于A_1组(P＜0．01),C_1组和 D_1组的5项参数均显著低于A_1组(P＜0．05)。与A_2组相比较,B_2组的5项参数均没有显著性差异(P＞0．05),C_2组DSP和ESC显著减少(P＜0．05),D_2组则TW、EW、DSP和ESC显著降低(P＜0．01)。DES染毒各组的睾丸曲细精管出现了不同程度的萎缩,且随剂量增加病理改变程度加重。恢复期后,睾丸曲细精管组织结构B_2组显示正常,C_2组有明显恢复,D_2组未得到恢复。结论：青春期大鼠受DES持续作用可导致睾丸生精上皮损伤,生精能力下降。损伤较轻组在成年后,睾丸组织结构和生精功能得到不同程度的恢复,但损伤程度重者未见恢复。