解偶联蛋白2与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系

目的探讨解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系。方法通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立脓毒症模型。将40只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为5组,每组8只:对照组(腹腔注射生理盐水)、脓毒症6 h组(LPS-6 h组)、脓毒症12 h组(LPS-12 h组)、脓毒症24 h组(LPS-24 h组)和脓毒症48 h组(LPS-48 h组)。在相应时间点留取大鼠血清和心脏组织,提取心肌线粒体,通过酶标仪检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测线粒体肿胀度和线粒体膜电位(MMP),采用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)测定UCP2蛋白表达水平;电镜观察心肌组织线粒体形态学变化。结果与对照组比较,LPS各组血清CK、CK-MB水平、心肌组织ROS水平和线粒体肿胀度均明显升高(P0.05),峰值在LPS-24 h组;而LPS各组线粒体膜电位明显下降(P0.05),LPS-24 h组降至最低。Western blot检测发现LPS各组心肌组织UCP2的表达水平较对照组明显升高(P0.05),峰值在LPS-24 h组。电镜观察结果发现LPS大鼠心肌线粒体肿胀,线粒体膜部分破碎,有空泡形成,LPS-24 h组病变最严重。LPS大鼠心肌线粒体ROS水平、线粒体肿胀度与UCP2表达量呈正相关(分别r=0.796、0.893,P0.05);LPS大鼠心肌MMP与UCP2表达量呈负相关(r=-0.903,P0.05)。结论在脓毒症大鼠模型中,心肌和心肌线粒体都明显损伤,心肌组织UCP2的表达与线粒体损伤密切相关,推测UCP2可能在脓毒症心肌线粒体损伤中起重要作用。     

维生素C对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用北大核心CSCD

目的探讨维生素C对脓毒症大鼠脑损伤的改善作用。方法将SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、假手术组、脓毒症组、脓毒症治疗组。脓毒症组通过阑尾结扎穿孔术建立脓毒症模型。脓毒症治疗组在造模后3 h通过尾静脉注射维生素C,其余组大鼠予等量9 g/L盐水。分别在相应时间点进行神经反射评估后断头取脑。提取脑组织蛋白,按照检测试剂盒说明书测定活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA） 、一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和过氧化氢酶（CAT）。采用苏木精－伊红（HE）染色观察脑组织病理学变化。结果脓毒症组（7 d生存率为30%）较对照组（7 d生存率为100%）及假手术组（7 d生存率为100%）生存率明显下降,脓毒症治疗组（7 d生存率为45%）较脓毒症组生存率明显升高,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。神经反射评分在脓毒症组6 h开始下降,24 h达到最低（6.00±0.53）,脓毒症治疗组较脓毒症组评分明显升高（7.62±0.52）,72 h开始逐渐恢复（8.63±0.52）,与脓毒症组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。ROS、SOD、MDA、NO、iNOS在脓毒症组和脓毒症治疗组24 h均达高峰,72 h已经下降,脓毒症治疗组较脓毒症组均有显著下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;CAT的变化与之相反。SOD/CAT在脓毒症组24 h最高,脓毒症治疗组则有明显改善,SOD/CAT与MDA呈强正相关（r＝0.968,P〈0.05）;HE染色可见脓毒症组脑组织结构明显破坏,脓毒症治疗组较脓毒症组有明显改善。结论在SD大鼠脓毒症模型中,静脉给予维生素C可明显改善生存率及脑病症状,其机制可能与减少氧化应激有关。     

解偶联蛋白2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用

目的：探讨解偶联蛋白2（UCP2）过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用,阐明其作用机制。方法：构建UCP2过表达的H9C2心肌细胞。H9C2心肌细胞随机分为正常对照组、脂多糖/聚糖肽（LPS/PepG）刺激组、空病毒组和过表达组,除正常对照组外其余各组予LPS/PepG刺激。采用RT-PCR和Western blotting法检测各组心肌细胞中UCP2 mRNA和蛋白表达水平,采用分光光度计法和ELISA法检测脓毒症心肌细胞模型建立指标肌酸激酶（CK）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,采用电镜观察各组心肌细胞线粒体形态表现,采用流式细胞术检测各组心肌细胞线粒体膜电位（MMP）水平,采用多功能酶标仪检测各组心肌细胞线粒体活性氧（ROS）和三磷酸腺苷（ATP）水平。结果：与正常对照组比较,LPS/PepG刺激组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显升高（P<0.05）,且线粒体形态明显损害,MMP水平明显降低（P<0.05）,线粒体ROS水平明显升高（P<0.05）,ATP水平明显降低（P<0.05）;与LPS/PepG刺激组比较,过表达组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显降低（P<0.05）,且线粒体形态结构明显好转,MMP水平明显升高（P<0.05）,线粒体ROS水平明显降低（P<0.05）,ATP水平明显升高（P<0.05）;与LPS/PepG刺激组比较,空病毒组心肌细胞中CK、TNF-α、MMP、ROS和ATP水平差异均无统计学意义（P>0.05）,线粒体肿胀度无明显改变。结论：UCP2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体有保护作用,其机制可能与UCP2通过解偶联作用调控膜电位,进而影响ROS和ATP的合成有关。     

脂多糖诱导脓毒症大鼠远期脑线粒体损伤的初步研究

目的 初步探讨脓毒症大鼠远期脑线粒体结构和功能损伤。方法 将Wistar大鼠随机分为对照组和脓毒症组,通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖(LPS,10 mg/kg)建立脓毒症大鼠模型并进行生存率实验。脓毒症组大鼠分别在腹腔注射革兰阴性菌LPS后12、24、48和72 h各处死8只,对照组大鼠(n=8)在给予等量生理盐水腹腔注射后处死,取脑组织提取线粒体。通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP)及线粒体肿胀度,使用试剂盒检测呼吸链复合物酶(Ⅰ~Ⅴ)活性。通过苏木精-伊红(HE)染色及电镜观察脑组织和线粒体形态学变化。结果 脓毒症组较对照组生存率明显下降(P< 0.01)。脓毒症组MMP和呼吸链复合物酶(Ⅰ~Ⅴ)活性较对照组明显下降(P< 0.05),48 h降至最低,72 h部分恢复;脓毒症组线粒体肿胀度较对照组明显升高(P< 0.05),48 h达到峰值,72 h部分恢复;HE染色可见脑组织结构明显破坏,同时电镜结果观察到线粒体肿胀,少量线粒体出现“空泡样变”。结论 在LPS诱导脓毒症大鼠模型中,脑线粒体结构和功能均受损,损伤高峰可能发生在48 h左右。